微管作用化療藥物誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞自噬-自噬性細(xì)胞死亡及其與胃癌細(xì)胞凋亡敏感性的關(guān)系.pdf

1、背景及目的：以微管為作用靶點(diǎn)的化療藥物，如紫杉醇、長(zhǎng)春新堿等，能誘導(dǎo)多種惡性腫瘤(包括胃癌)細(xì)胞凋亡，但不同細(xì)胞株的凋亡敏感性有很大差別；自噬本是細(xì)胞一種正常的生理活動(dòng)，但近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)在一些治療因素下，腫瘤細(xì)胞中異常的自噬活動(dòng)能影響腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)歸，一方面，自噬會(huì)導(dǎo)致某種形式的程序性細(xì)胞死亡，凋亡和自噬性細(xì)胞死亡可能作為彼此的后備機(jī)制執(zhí)行不可逆細(xì)胞死亡的指令，另一方面，自噬可能是腫瘤細(xì)胞的一種保護(hù)機(jī)制，減輕了不良因素對(duì)細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用

2、。目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)關(guān)于自噬及自噬性細(xì)胞死亡在化療誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞死亡中作用的報(bào)道。本研究旨在了解胃癌細(xì)胞在對(duì)微管作用化療藥物的反應(yīng)中自噬和自噬性細(xì)胞死亡的存在，以及自噬和凋亡的相互關(guān)系，從而對(duì)促進(jìn)胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性提出新的思路。 方法：Annexin V/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)和MTT法分別檢測(cè)紫杉醇、長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)SGC-7901及BGC-823細(xì)胞的凋亡率和總死亡率，死細(xì)胞DAPI染色熒光顯微鏡檢測(cè)非凋亡性細(xì)胞死亡，吖啶橙染色流

3、式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡分別定量、定性檢測(cè)自噬和自噬性細(xì)胞死亡的存在，免疫印記法檢測(cè)Beclin 1蛋白表達(dá)，自噬特異性阻斷劑3-甲基腺嘌呤(3-MA)和紫杉醇共同作用抑制細(xì)胞自噬后流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率的變化，caspase廣譜抑制劑(z-VAD-FMK)和紫杉醇共同作用抑制細(xì)胞凋亡后流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞自噬率的變化。 結(jié)果：1．紫杉醇和長(zhǎng)春新堿可以誘導(dǎo)胃癌SGC-7901和BGC-823細(xì)胞凋亡，并且具有劑量和時(shí)間依賴(lài)性，但兩株

4、細(xì)胞對(duì)藥物誘導(dǎo)的凋亡敏感性不同。紫杉醇0.1μmol/l、長(zhǎng)春新堿50μg/ml作用于SGC-7901細(xì)胞48h凋亡率達(dá)50％，作用于BGC-823細(xì)胞48h凋亡率分別為34.57％±5.55％和38.90％±1.27％，所以，BGC-823細(xì)胞相對(duì)SGC-7901細(xì)胞為對(duì)紫杉醇、長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡不敏感細(xì)胞株。由細(xì)胞凋亡率和總死亡率之間的顯著差別，并結(jié)合死亡細(xì)胞DAPI染色結(jié)果證明紫杉醇、長(zhǎng)春新堿可以誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞出現(xiàn)非凋亡性細(xì)胞死

5、亡，死亡細(xì)胞吖啶橙染色熒光顯微鏡檢測(cè)結(jié)果提示這種非凋亡性細(xì)胞死亡是自噬性細(xì)胞死亡，輔助免疫印記實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證實(shí)了自噬性細(xì)胞死亡的存在并且與Beclin 1基因激活有關(guān)。2．紫杉醇、長(zhǎng)春新堿處理SGC-7901和BGC-823細(xì)胞早期(24h內(nèi))即可出現(xiàn)明顯的細(xì)胞自噬性變化，紫杉醇誘導(dǎo)的自噬高峰期出現(xiàn)在藥物作用3h-6h，長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)的自噬高峰期出現(xiàn)在藥物作用24h-36h，并且BGC-823細(xì)胞相對(duì)為對(duì)紫杉醇、長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬敏感的