自噬在HBx誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞損傷中的作用及其機(jī)制探討.pdf

1、博士學(xué)位論文論文題目自噬在HBx誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞損傷中的作用及其機(jī)制探討研究生姓名王鵬指導(dǎo)教師姓名錢海鑫教授專業(yè)名稱普通外科學(xué)研究方向肝膽外科論文提交日期2012年9月自噬在HBx誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞損傷中的作用及其機(jī)制探討中文摘要I自噬在HBx誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞損傷中的作用及其機(jī)制探討中文摘要目的目的:觀察自噬在乙肝病毒X蛋白（HBx）誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞損傷中的作用，并初步探討其分子調(diào)控機(jī)制。方法：方法：1.運(yùn)用HBx轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，采用免疫印跡技

2、術(shù)檢測(cè)自噬標(biāo)記蛋白LC3ⅡLC3Ⅰ，beclin1及溶酶體相關(guān)蛋白Lamp2a的表達(dá)，透射電鏡觀察HepG2細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化及MDC染色自噬囊泡，觀察HBx對(duì)細(xì)胞自噬水平的影響。2.在mT抑制劑雷帕霉素和P13KAkt抑制劑LY294002的干預(yù)下，采用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)自噬標(biāo)記蛋白LC3ⅡLC3Ⅰ在HepG2細(xì)胞中的表達(dá)，透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，初步探討自噬在HBx誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞損傷中的分子調(diào)控機(jī)制。3.使用HepG2.2.15細(xì)

3、胞，采用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)自噬標(biāo)記蛋白LC3ⅡLC3Ⅰ，觀察mT、P13KAkt的表達(dá)變化。并觀察在雷帕霉素LY294002的干預(yù)下，LC3ⅡLC3Ⅰ、mT、P13KAkt的表達(dá)變化。結(jié)果：結(jié)果：1.MDC染色和透射電鏡結(jié)果均顯示HBx轉(zhuǎn)染后可誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞發(fā)生自噬；免疫印跡技術(shù)結(jié)果顯示，HBx轉(zhuǎn)染上調(diào)HepG2細(xì)胞LC3ⅡLC3Ⅰ，beclin1及Lamp2a的表達(dá)。2.HBx轉(zhuǎn)染可上調(diào)HepG2細(xì)胞中mT、PI3KAkt的表達(dá)。3

4、.透射電鏡與免疫印跡技術(shù)結(jié)果均顯示使用mT抑制劑雷帕霉素可增強(qiáng)HBx轉(zhuǎn)染后的HepG2細(xì)胞LC3ⅡLC3Ⅰ的表達(dá)，上調(diào)HepG2細(xì)胞的自噬水平。4.透射電鏡與免疫印跡技術(shù)結(jié)果顯示使用P13KAkt抑制劑LY294004可明顯抑制HBx轉(zhuǎn)染后的HepG2細(xì)胞LC3ⅡLC3Ⅰ的表達(dá)，下調(diào)HepG2細(xì)胞的自噬水平。5.HepG2.2.15細(xì)胞中自噬的表達(dá)與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HBx的HepG2細(xì)胞相似。結(jié)論：結(jié)論：HBx轉(zhuǎn)染可誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞發(fā)生自噬。