自噬在HBx誘導(dǎo)肝癌細胞損傷中的作用及其機制探討.pdf

1、博士學(xué)位論文論文題目自噬在HBx誘導(dǎo)肝癌細胞損傷中的作用及其機制探討研究生姓名王鵬指導(dǎo)教師姓名錢海鑫教授專業(yè)名稱普通外科學(xué)研究方向肝膽外科論文提交日期2012年9月自噬在HBx誘導(dǎo)肝癌細胞損傷中的作用及其機制探討中文摘要I自噬在HBx誘導(dǎo)肝癌細胞損傷中的作用及其機制探討中文摘要目的目的:觀察自噬在乙肝病毒X蛋白（HBx）誘導(dǎo)HepG2細胞損傷中的作用，并初步探討其分子調(diào)控機制。方法：方法：1.運用HBx轉(zhuǎn)染HepG2細胞，采用免疫印跡技

2、術(shù)檢測自噬標記蛋白LC3ⅡLC3Ⅰ，beclin1及溶酶體相關(guān)蛋白Lamp2a的表達，透射電鏡觀察HepG2細胞超微結(jié)構(gòu)變化及MDC染色自噬囊泡，觀察HBx對細胞自噬水平的影響。2.在mT抑制劑雷帕霉素和P13KAkt抑制劑LY294002的干預(yù)下，采用免疫印跡技術(shù)檢測自噬標記蛋白LC3ⅡLC3Ⅰ在HepG2細胞中的表達，透射電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)，初步探討自噬在HBx誘導(dǎo)HepG2細胞損傷中的分子調(diào)控機制。3.使用HepG2.2.15細

3、胞，采用免疫印跡技術(shù)檢測自噬標記蛋白LC3ⅡLC3Ⅰ，觀察mT、P13KAkt的表達變化。并觀察在雷帕霉素LY294002的干預(yù)下，LC3ⅡLC3Ⅰ、mT、P13KAkt的表達變化。結(jié)果：結(jié)果：1.MDC染色和透射電鏡結(jié)果均顯示HBx轉(zhuǎn)染后可誘導(dǎo)HepG2細胞發(fā)生自噬；免疫印跡技術(shù)結(jié)果顯示，HBx轉(zhuǎn)染上調(diào)HepG2細胞LC3ⅡLC3Ⅰ，beclin1及Lamp2a的表達。2.HBx轉(zhuǎn)染可上調(diào)HepG2細胞中mT、PI3KAkt的表達。3

4、.透射電鏡與免疫印跡技術(shù)結(jié)果均顯示使用mT抑制劑雷帕霉素可增強HBx轉(zhuǎn)染后的HepG2細胞LC3ⅡLC3Ⅰ的表達，上調(diào)HepG2細胞的自噬水平。4.透射電鏡與免疫印跡技術(shù)結(jié)果顯示使用P13KAkt抑制劑LY294004可明顯抑制HBx轉(zhuǎn)染后的HepG2細胞LC3ⅡLC3Ⅰ的表達，下調(diào)HepG2細胞的自噬水平。5.HepG2.2.15細胞中自噬的表達與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HBx的HepG2細胞相似。結(jié)論：結(jié)論：HBx轉(zhuǎn)染可誘導(dǎo)HepG2細胞發(fā)生自噬。