染料木素對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC-823的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：采用人胃癌細(xì)胞BGC-823作為體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，再次?yàn)證染料木素對(duì)人胃癌細(xì)胞的生長影響，并研究了Gen對(duì)腫瘤相關(guān)蛋白COX-2及其調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活性變化，旨在探討將COX-2作為胃癌防治的一種新型靶點(diǎn)的可行性，并分析其可能的作用途徑，有望為將Gen用于胃癌防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：⑴采用形態(tài)學(xué)觀察Gen處理前后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。⑵MTT檢測Gen對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC-823的生長抑制作用。⑶流式細(xì)胞術(shù)分析了細(xì)胞周期分

2、布。⑷Hoechst染色和流式細(xì)胞術(shù)分析Gen對(duì)細(xì)胞的凋亡作用。⑸western blotting檢測藥物處理前后細(xì)胞中COX-2蛋白的表達(dá)情況。⑹ELISA法檢測轉(zhuǎn)錄因子NF-κB與DNA的結(jié)合活性。 結(jié)果：①Gen作用后倒置顯微鏡下觀察顯示，藥物作用組細(xì)胞數(shù)明顯減少，細(xì)胞皺縮、變圓、與鄰近細(xì)胞分離，多為單個(gè)分布，其中部分脫離培養(yǎng)板而呈漂浮狀。②MTT試驗(yàn)結(jié)果顯示，Gen抑制人胃癌細(xì)胞BGC-823的生長，且呈濃度-時(shí)間依賴性

3、，72h半數(shù)抑制濃度約為100μM，與對(duì)照組相比，200μM的Gen抑制率達(dá)78.34±3.12％（p<0.05）。③流式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞周期情況進(jìn)行分析的結(jié)果顯示，BGC-823細(xì)胞經(jīng)Gen處理后G0/G1期細(xì)胞明顯減少，G2期細(xì)胞明顯增加，S期細(xì)胞無明顯改變，表現(xiàn)出了G2/M期阻滯；且在不同藥物濃度下出現(xiàn)不同程度的凋亡峰。④應(yīng)用Hoechst染色方法進(jìn)一步檢測了藥物作用后細(xì)胞凋亡情況，與對(duì)照組相比，Gen作用后出現(xiàn)不同程度的凋亡細(xì)胞，與

4、流式細(xì)胞術(shù)的凋亡分析結(jié)果有較好的一致性。熒光顯微鏡下，藥物組可觀察到部分細(xì)胞凋亡的表現(xiàn)如細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)濃縮、邊集、核碎裂等細(xì)胞凋亡特征，而陰性對(duì)照組所有細(xì)咆染色均勻。⑤Gen作用后，BGC-823細(xì)胞中COX-2蛋白表達(dá)下調(diào)，NF-κB與DNA的結(jié)合活性也被抑制。⑥NF-κB的抑制劑PDTC不僅能夠抑制NF-κB的結(jié)合活性，而且能夠直接抑制COX-2的表達(dá)。 結(jié)論：Gen可通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和周期G2/M阻滯的方式抑制胃癌細(xì)胞B