17-AAG對(duì)人胃癌細(xì)胞株BGC-823增殖和凋亡的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、胃癌是一種常見(jiàn)的消化系統(tǒng)的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的生命健康。尋找有效的胃癌治療方法，提高胃癌患者的生存率和生活質(zhì)量迫在眉睫。Hsp90是一種重要的熱休克分子伴侶蛋白，可以調(diào)控和維持多種蛋白的構(gòu)象和功能。因此，Hsp90抑制劑通過(guò)調(diào)控蛋白的表達(dá)來(lái)影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)選取人胃癌細(xì)胞株BGC-823作為研究對(duì)象，探討Hsp90抑制劑17-AAG對(duì)人胃癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響并了解其相關(guān)機(jī)制。
　　第一部分、17-AAG對(duì)人胃癌細(xì)

2、胞株BGC-823增殖的影響
　　目的:研究17-AAG對(duì)人胃癌細(xì)胞株BGC-823增殖的影響及其機(jī)制。
　　方法:
　　1.以不同濃度的17-AAG作用于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人胃癌細(xì)胞株BGC-823，在不同的作用時(shí)間點(diǎn)通過(guò)MTT比色法檢測(cè)其光密度（OD值）;
　　2.采用MTT比色法測(cè)定活細(xì)胞數(shù)量，繪制經(jīng)17-AAG作用后人胃癌細(xì)胞株BGC-823的生長(zhǎng)曲線，觀察藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的長(zhǎng)期作用;
　　3.平板克隆實(shí)驗(yàn)

3、檢測(cè)17-AAG對(duì)單個(gè)細(xì)胞增殖能力的影響;
　　4.采用流式細(xì)胞分析術(shù)對(duì)1000 nmol/L17-AAG作用48h后BGC-823的細(xì)胞周期進(jìn)行分析;
　　5.Western Blot技術(shù)檢測(cè)增殖相關(guān)蛋白的表達(dá)并分析17-AAG的作用機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.MTT法結(jié)果顯示17-AAG抑制人胃癌細(xì)胞株BGC-823的增殖，且其抑制作用隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)，濃度越高其抑制作用也越強(qiáng)。
　　2.生長(zhǎng)曲

4、線實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)17-AAG有長(zhǎng)期抑制人胃癌細(xì)胞株BGC-823生長(zhǎng)的作用。
　　3.平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)人胃癌細(xì)胞株BGC-823培養(yǎng)11天后克隆形成率為57.29％，17-AAG100 nmol/L和1000 nmol/L藥物處理組的克隆形成率分別下降至53.38％和8.08％，與空白對(duì)照組相比具有極顯著性差異(P＜0.01)。
　　4.17-AAG1000 nmol/L作用細(xì)胞48h后，G1期細(xì)胞數(shù)量明顯減少，(P＜

5、0.05)，S期細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比則增多，與對(duì)照組相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.17-AAG可以上調(diào)蛋白CDK4的表達(dá)、下調(diào)蛋白PCNA的表達(dá)。而17-AAG對(duì)蛋白Akt1和MIF的表達(dá)均為抑制作用。
　　結(jié)論:
　　1.17-AAG對(duì)BGC-823細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用呈時(shí)間和濃度依賴(lài)性，且這種抑制作用持續(xù)時(shí)間長(zhǎng);
　　2.17-AAG降低BGC-823細(xì)胞平板克隆形成能力;
　　3.

6、17-AAG可以干擾人胃癌細(xì)胞株BGC-823的細(xì)胞周期;
　　4.17-AAG抑制細(xì)胞增殖與引起細(xì)胞周期阻滯有關(guān)，其干擾細(xì)胞周期進(jìn)程可能與上調(diào)蛋白CDK4和下調(diào)蛋白PCNA的表達(dá)有關(guān);
　　5.17-AAG抑制細(xì)胞增殖還與下調(diào)MIF的表達(dá)，抑制Akt通路的激活有關(guān)。
　　第二部分、17-AAG對(duì)人胃癌細(xì)胞株BGC-823凋亡的影響
　　目的:研究17-AAG對(duì)人胃癌細(xì)胞株BGC-823凋亡的影響及其相關(guān)機(jī)制。<

7、br>　　方法:
　　1.在光學(xué)顯微鏡下觀察17-AAG對(duì)人胃癌細(xì)胞株BGC-823形態(tài)的影響;
　　2.采取DAPI染色的方法觀察17-AAG誘導(dǎo)BGC-823細(xì)胞凋亡的現(xiàn)象;
　　3.Western Blot技術(shù)檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)并分析17-AAG的作用機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.經(jīng)不同濃度的17-AAG作用48h后，人胃癌細(xì)胞株BGC-823部分脫壁漂浮于培養(yǎng)液中，貼壁細(xì)胞也出現(xiàn)變圓皺縮的現(xiàn)象。<

8、br>　　2.DAPI染色法結(jié)果顯示，隨著藥物濃度的增加，BGC-823細(xì)胞的凋亡程度逐漸增強(qiáng)。凋亡細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核固縮，染色質(zhì)致密，藍(lán)色熒光增強(qiáng)的現(xiàn)象，甚至出現(xiàn)凋亡小體。
　　3.17-AAG誘導(dǎo)凋亡抑制蛋白Bcl-2的表達(dá)減少，促凋亡蛋白Bax和p53的表達(dá)增多。隨著藥物濃度的升高的凋亡促進(jìn)蛋白與凋亡抑制蛋白的比值(Bax/Bcl-2)逐漸增大。
　　結(jié)論:
　　1.17-AAG作用于BGC-823會(huì)使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改