DHA聯(lián)合葫蘆素B對人胃癌BGC-823細胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　研究二十二碳六烯酸(docosahexaenoicacid，DHA)聯(lián)合葫蘆素B(cucurbitacin B)在體外對抗人胃癌BGC-823細胞增殖及凋亡的影響作用。
　　方法:
　　1、實驗分組:RPMI1640培養(yǎng)基配置4組用無水乙醇溶解后的DHA，終濃度分別為10、20、30、40μg/mL，對照組加入無水乙醇(＜0.5％，V/V);用RPMI1640培養(yǎng)基配置5組用DMSO溶解夠得葫蘆素B，終濃度

2、為0.01、0.1、1、10、100μg/mL，空白組為等體積培養(yǎng)基，對照組為加入DMSO(＜2％，V/V)。得出各藥物的半對數(shù)抑制濃度(IC50)值，選取均小于單種藥物IC50的DHA（20μg/mL）聯(lián)合葫蘆素B（10μg/mL）作用于人胃癌BGC-823細胞，對照組加入無水乙醇(＜0.5％，V/V)和DMSO(＜2％，V/V):
　　2、利用NADH酶染色顯微鏡下觀察人胃癌BGC-823細胞在分別加入DHA（20μg/mL）

3、、葫蘆素B（10μg/mL）及DHA（20μg/mL）聯(lián)合葫蘆素B（10μg/mL）后，細胞形態(tài)學上的變化;
　　3、利用吉姆薩染色顯微鏡下觀察人胃癌BGC-823細胞在分別加入DHA（20μg/mL）、葫蘆素B（10μg/mL）及DHA（20μg/mL）聯(lián)合葫蘆素B（10μg/mL）后，細胞形態(tài)學上的變化;
　　4、采用四氮唑藍比色法（MTT法），在限定時間，且不同濃度的前提下，研究DHA（10、20、30、40μg/mL

4、）組、葫蘆素B(0.01、0.1、1、10、100μg/mL)組、DHA（20μg/mL）聯(lián)合葫蘆素B(0.01、0.1、1、10、100μg/mL)不同濃度加藥組對胃癌BGC-823細胞增值的影響;
　　5、通過流式細胞檢測法分別檢測DHA（20μg/mL）加藥組、葫蘆素B（10μg/mL）加藥組、DHA(20μg/mL)聯(lián)合葫蘆素B（10μg/mL）加藥組細胞周期及凋亡的情況;
　　6、所有數(shù)據(jù)用mean±SD表示，采用

5、SPSS16統(tǒng)計軟件包行單因素方差分析，在某些實驗中用雙因素方差分析、Pearson相關分析，P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1、NADH酶染色法在顯微鏡下明顯可見相同時間下，隨著藥物濃度的增加，DHA（20μg/mL）加藥組、葫蘆素B（10μg/mL）加藥組細胞凋亡現(xiàn)象愈加明顯，且DHA（20μg/mL）聯(lián)合不同濃度葫蘆素B組用藥組凋亡比DHA（20μg/mL）組、葫蘆素B（10μg/mL）組更為徹底。

6、r>　　2、吉姆薩染色法在顯微鏡下明顯可見相同時間下，隨著藥物濃度的增加，DHA（20μg/mL）加藥組、葫蘆素B（10μg/mL）加藥組細胞凋亡現(xiàn)象愈加明顯，且DHA（20μg/mL）聯(lián)合不同濃度葫蘆素B組用藥組凋亡比DHA（20μg/mL）組、葫蘆素B（10μg/mL）組更為徹底。
　　3、根據(jù)MTT法，限定用藥時間，DHA加藥組、葫蘆素B加藥組、DHA（20μg/mL）聯(lián)合葫蘆素B不同濃度加藥組對人胃癌BGC-823細胞的增

7、值抑制作用呈濃度依賴性作用，且聯(lián)合用藥組比分別利用DHA、葫蘆素B直接作用其細胞增殖抑制更為明顯，更有效的降低了細胞的存活率，且在相同時間隨著藥物濃度的提高，作用效果也隨之提高。作用效果以公式(CI)=AB％/A％×B％計算，（CI=1表示相加，＜1表示協(xié)同，＞1表示拮抗）。選用均低于單藥IC50值得DHA20μg/mL聯(lián)合葫蘆素B10μg/mL對細胞抑制率的CI為0.591±0.105，說明聯(lián)合用藥具有協(xié)同作用。
　　4、流式細