冬凌草甲素對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞抗腫瘤作用及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　探討天然植物冬凌草的主要活性成分—冬凌草甲素（Oridonin）的抗胃癌作用及其機(jī)制，為開發(fā)高效、低毒的抗胃癌新藥，提供實(shí)驗(yàn)資料和理論依據(jù)。
　　方法：
　　應(yīng)用人低分化胃腺癌 BGC-823細(xì)胞系進(jìn)行體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用移植瘤裸鼠模型進(jìn)行體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，共兩部分內(nèi)容。體外實(shí)驗(yàn)：
　?、俨捎肕TT法檢測(cè)增殖抑制率。
　?、诘怪蔑@微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，探討冬凌草甲素對(duì)胃癌細(xì)胞增殖和的影響；
　

2、?、勖庖呒?xì)胞化學(xué)方法，測(cè)定冬凌草甲素對(duì)胃癌細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)的影響。
　　體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：
　　①制備裸鼠移植瘤模型，進(jìn)行體外藥敏實(shí)驗(yàn)，測(cè)定腫瘤生長(zhǎng)抑制率。
　?、谕ㄟ^腫瘤組織切片進(jìn)行HE染色光鏡形態(tài)學(xué)觀察。
　?、跼T-PCR和免疫組化方法檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）、整合素β3(Integrin-β3)、細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原（PCNA）的表達(dá)，并分析它們與腫瘤內(nèi)部微血管數(shù)量（CD31）的關(guān)系。從而進(jìn)一步探討

3、冬凌草甲素對(duì)胃癌微血管生成的影響，明確其體內(nèi)抗腫瘤作用及分子機(jī)制。體外細(xì)胞藥敏實(shí)驗(yàn)與體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)相結(jié)合，從分子、細(xì)胞、整體水平系統(tǒng)地揭示冬凌草甲素對(duì)胃癌的抗腫瘤作用及其機(jī)制。
　　結(jié)果體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)：
　?、費(fèi)TT藥物敏感性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，冬凌草甲素能以時(shí)間和濃度依賴的方式抑制BGC-823細(xì)胞的增殖。12h、24h、48h和72h的中效抑制濃度分別為17.08±2.38μg/ml、12.41±1.97μg/ml、9.52±0.9

4、3μg/ml和8.76±0.90μg/ml。濃度6μg/ml以下抑制效果較弱，而12μg/ml~48μg/ml抑制效果顯著提高，48μg/ml以上抑制率增高不顯著。
　?、诘怪蔑@微鏡下動(dòng)態(tài)觀察表明，冬凌草甲素作用后，細(xì)胞密度降低，增殖減弱；細(xì)胞突起減少，細(xì)胞變圓、變?。患?xì)胞貼壁差，出現(xiàn)懸浮細(xì)胞。AO/EB染色可見細(xì)胞核固縮、染色質(zhì)邊集，核碎裂、溶解等凋亡、壞死表現(xiàn)。形態(tài)學(xué)改變與冬凌草甲素的濃度及作用時(shí)間均呈正相關(guān)。
　?、跙

5、GC-823細(xì)胞經(jīng)冬凌草甲素作用后VEGF蛋白表達(dá)逐漸降低。
　　體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)：
　?、俣璨菁姿貙?duì)裸鼠移植瘤具有明顯的抑瘤效應(yīng)，低劑量、中劑量和高劑量組的抑瘤率分別為25.73％、45.05%和63.54%，與生理鹽水形成鮮明的對(duì)照（P<0.05），且各濃度組之間，隨著劑量增加，抑瘤率顯著增高（P<0.05）。
　?、诠忡R下顯示，治療組瘤細(xì)胞呈現(xiàn)出不同程度的退行性變，核深染、固縮，局灶性壞死及單個(gè)細(xì)胞死亡。

6、　?、叟c陰性對(duì)照組比較，冬凌草甲素低、中、高劑量分別作用14天后，VEGF mRNA、Integrin-β3 mRNA水平逐漸降低（P<0.05），并呈劑量依賴關(guān)系；同時(shí)，隨著藥物劑量的增加，腫瘤細(xì)胞的PCNA、VEGF、CD31蛋白表達(dá)逐漸減少（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)與體內(nèi)移植瘤研究提示，冬凌草甲素對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞株及其裸鼠移植瘤均有顯著的抗腫瘤作用。其抗腫瘤機(jī)制可能與抑制腫瘤細(xì)胞增殖、減