可溶性人TRAIL誘導胃癌細胞BGC-823凋亡的研究.pdf

1、目的：通過構(gòu)建pBud-EGFP-TRAIL質(zhì)粒，在體內(nèi)外觀察可溶性人TRAIL蛋白(sTRAIL)對人低分化胃癌細胞株BGC-823的作用。 方法：以EFGP為報告基因，sTRAIL為目的基因，構(gòu)建pBud-EGFP-TRAIL重組質(zhì)粒，并通過酶切和測序?qū)χ亟M體進行鑒定。經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的胃癌細胞BGC-823，RT-PCR.及Westernblot檢測sTRAIL mRNA及其蛋白的表達，用熒光顯微鏡觀察EGFP的

2、表達，MTT 法檢測轉(zhuǎn)染后對胃癌細胞的生長抑制率，TUNEL 法觀察細胞的凋亡情況，流式細胞儀分析轉(zhuǎn)染后胃癌細胞的凋亡率。然后，將重組質(zhì)粒pBud-EGFP-TRAIL注入胃癌細胞BGC-823裸鼠皮下移植瘤內(nèi)，通過比較腫瘤體積及H.E染色觀察腫瘤組織病理變化，TUNEL染色檢測細胞凋亡情況，研究其在體內(nèi)環(huán)境下對腫瘤細胞生長的影響。 結(jié)果：測序結(jié)果證實pBud-EGFP-TRAIL載體構(gòu)建成功，質(zhì)粒經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染后，通過表達sTR

3、AIL蛋白對胃癌細胞發(fā)揮作用。MTT法顯示轉(zhuǎn)染該質(zhì)粒的細胞的生長抑制率明顯高于對照組，TUNEL法顯示細胞核固縮，核染色質(zhì)聚集或斷裂，形成凋亡小體。流式細胞儀結(jié)果表明轉(zhuǎn)染該質(zhì)粒的細胞的的凋亡率明顯高于對照組。體內(nèi)實驗表明，注射pBud-EGFP-TRAIL質(zhì)粒的裸鼠移植瘤體積明顯小于對照組，腫瘤組織切片H.E染色可見核大量破碎、溶解，腫瘤細胞大量死亡，并出現(xiàn)大量纖維化結(jié)構(gòu)包裹腫瘤組織，TUNEL染色顯示pBud-EGFP-TRAIL組有