全反式維甲酸與奧沙利鉑在誘導(dǎo)人胃癌BGC-823細(xì)胞凋亡中的協(xié)同作用.pdf

1、背景和目的
　　 胃癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤,在世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤中占第4位,死亡率占所有惡性腫瘤的第2位。在我國(guó)胃癌發(fā)病率和死亡率分別占惡性腫瘤的第1位和第3位。針對(duì)胃癌的治療藥物也層出不窮,短期內(nèi)顯示出良好的臨床療效。然而大規(guī)模的隨訪研究結(jié)果表明,腫瘤患者的遠(yuǎn)期生存率并沒(méi)有因?yàn)榛熕幬锏氖褂枚玫斤@著提高,而且有些化療藥物嚴(yán)重的毒副作用限制了它們?cè)谂R床上的應(yīng)用。探索低劑量多藥聯(lián)合應(yīng)用,是腫瘤藥物研究的一個(gè)重要方向。

2、　　 全反式維甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)是維生素A的主要代謝產(chǎn)物,是維持生長(zhǎng)發(fā)育不可缺少的物質(zhì),是一種公認(rèn)的誘導(dǎo)分化劑。奧沙利鉑(Oxaliplatin,L-OHP)是第三代鉑類抗癌化合物,主要用于晚期大腸癌的治療。由于其與第一代順鉑和第二代卡鉑均無(wú)交叉耐藥性,并且耐受性好、毒副作用小,因而受到廣泛重視。
　　 ATRA與L-OHP伸聯(lián)合作用于胃癌是否能夠提高療效,目前未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)從體

3、外細(xì)胞學(xué)角度觀察全反式維甲酸(ATRA)與奧沙利鉑(L-OHP)對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用,從而為進(jìn)一步研究提供理論基礎(chǔ)。
　　 材料和方法：
　　 1.用ATRA和L-OHP單獨(dú)及聯(lián)合作用于BGC-823細(xì)胞,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化；
　　 2.采用MTT法檢測(cè)ATRA及L-OHP分別作用24h、48h、72h后BGC-823細(xì)胞的增殖抑制率；
　　 3.采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)ATRA及

4、L-OHP作用48h后BGC-823細(xì)胞的凋亡率及周期變化；
　　 4.采用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)ATRA及L-OHP作用48h后BGC-823細(xì)胞中Bcl-2和Survivin蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.藥物作用24h后,細(xì)胞間隙增寬,胞內(nèi)顆粒增多,出現(xiàn)空泡；作用48h后,多數(shù)細(xì)胞漂浮于培養(yǎng)液中,少量細(xì)胞仍貼壁生長(zhǎng),并可見(jiàn)部分細(xì)胞的細(xì)胞核固縮、斷裂成碎片、核膜消失,細(xì)胞膜完整且有突起,呈凋亡晚期改變

5、；作用72h后,凋亡細(xì)胞數(shù)量逐漸增多。隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞碎片數(shù)量明顯增多,貼壁細(xì)胞數(shù)量顯著減少。
　　 2.ATRA對(duì)BGC-823細(xì)胞的抑制作用呈現(xiàn)時(shí)間依賴性,24h后對(duì)細(xì)胞的抑制作用不顯著,48h和72h后抑制作用相對(duì)明顯,與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。聯(lián)合用藥后抑制作用更加顯著,與ATRA組及L-OHP組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),最佳作用時(shí)間為加藥后48h。
　　

6、 3.ATRA作用細(xì)胞后,G0/G1期和G2/M期的細(xì)胞比率增加,S期的細(xì)胞比率下降；L-OHP作用細(xì)胞后,G0/G1期的細(xì)胞比率下降,S期和G2/M期的細(xì)胞比率增加；聯(lián)合用藥后G0/Gl期和G2/M期的細(xì)胞比率增加,S期的細(xì)胞比率下降；聯(lián)合用藥組與ATRA組、L-OHP組相比,凋亡率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 4.對(duì)照組中可以見(jiàn)到細(xì)胞質(zhì)中較多的Survivin蛋白和Bcl-2蛋白表達(dá),呈淺黃色到棕黃色顆粒。A

7、TRA組和L-OHP組陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)減少,而聯(lián)合用藥組的細(xì)胞表達(dá)數(shù)更少。聯(lián)合用藥組與ATRA組、L-OHP組相比,蛋白陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.ATRA對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞存在增殖抑制作用,且具有時(shí)間依賴性,最佳作用時(shí)間為48h,與L-OHP聯(lián)用后對(duì)BGC-823細(xì)胞的增殖抑制作用更顯著。
　　 2.ATRA可誘導(dǎo)人胃癌BGC-823細(xì)胞分化,形成G0/G1期阻滯；