bFGF和Celecoxib對(duì)胃癌BGC-823細(xì)胞株增殖、凋亡的影響.pdf

1、目的： 胃癌是世界上第二位的常見(jiàn)惡性腫瘤。因此，研究胃癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制，對(duì)防治胃癌及癌前病變具有非常重要的意義。堿性成纖維生長(zhǎng)因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系極為密切。非甾體抗炎藥(NSAIDs)可降低胃腸道腫瘤發(fā)生的危險(xiǎn)性，成為近年來(lái)腫瘤防治領(lǐng)域的又一研究熱點(diǎn)。celecoxib是非甾體抗炎藥的一種，目前celecoxib對(duì)BGC-823胃癌細(xì)胞株凋亡的影響機(jī)制不

2、清。本實(shí)驗(yàn)采取外源性bFGF和celecoxib(環(huán)氧合酶-2選擇性抑制劑)作用于胃癌BGC-823細(xì)胞，觀察其對(duì)胃癌BGC-823細(xì)胞株的生長(zhǎng)，PKB活性，環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase，COX-2)、核轉(zhuǎn)錄因子кB(nuclear factor-кB，NF-кB)及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表達(dá)變化的影響以及P13K/PKB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在此過(guò)程中

3、的作用，以探討bFGF和celecoxib在胃癌發(fā)病機(jī)制及防治胃癌中的作用和bFGF與celecoxib之間的相互作用影響。 方法： 1 熒光顯微鏡觀察celecoxib對(duì)胃癌BGC-823細(xì)胞株凋亡的影響。 2 MTT比色法觀察bFGF、PKB上游激酶P13K抑制劑wortmannin、celecoxib對(duì)胃癌BGC-823細(xì)胞株增殖的影響。 3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)celecoxib誘導(dǎo)胃癌BGC-823細(xì)

4、胞株凋亡。 4 Western blot方法檢測(cè)bFGF對(duì)PKB的活化作用，bFGF和celecoxib誘導(dǎo)的COX-2、NF-кB、VEGF表達(dá)變化。 結(jié)果： 1 bFGF對(duì)PKB活性的影響： 不同濃度bFGF誘導(dǎo)BGC-823細(xì)胞PKB活性增高，經(jīng)25ng/ml bFGF誘導(dǎo)后磷酸化PKB表達(dá)量最大。25ng/ml bFGF與BGC-823細(xì)胞共同孵育5，10，30，60min，PKB活性在bFGF作

5、用5min時(shí)開(kāi)始升高，作用10min時(shí)達(dá)到高峰，其后活性開(kāi)始下降，但均高于空白對(duì)照，各bFGF處理組與對(duì)照組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。經(jīng)wortmannin預(yù)處理后，胃癌BGC-823細(xì)胞PKB活性與未經(jīng)預(yù)處理組相比降低，且差異顯著(P<0.05)。 2 MTT比色試驗(yàn)： 顯示bFGF有明顯的促進(jìn)BGC-823細(xì)胞增殖的作用(P<0.05)。celecoxib具有明顯的抑制BGC-823細(xì)胞增殖的作用，且呈

6、明顯的劑量依賴性(P<0.05)。 3 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察 加入不同濃度的celecoxib后，光鏡下細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，部分貼壁細(xì)胞收縮變圓，漂浮。熒光顯微鏡觀測(cè)顯示celecoxib處理后，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，隨時(shí)間和藥物濃度的增加，出現(xiàn)凋亡細(xì)胞。 4 流式細(xì)胞術(shù) celecoxib作用24h可明顯誘導(dǎo)BGC-823細(xì)胞發(fā)生凋亡，與藥物濃度成正相關(guān)(r=0.99，P<0.01)。對(duì)照組、25、50μmol/

7、L組的細(xì)胞凋亡率分別為2.39％、33.69％、59.98％。 5 Western印跡分析 Western印跡分析顯示，bFGF能時(shí)效地誘導(dǎo)BGC-823細(xì)胞的COX-2、NF-кB、VEGF蛋白表達(dá)量增加。其中COX-2在24d,時(shí)、NF-кB在12小時(shí)和VEGF在24小時(shí)分別表達(dá)量達(dá)到高峰，各bFGF作用時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照比較結(jié)果有顯著性差異(P<0.01)。加入celecoxib后western印跡分析結(jié)果可見(jiàn)隨著藥物濃

8、度的升高COX-2、NF-кB、VEGF蛋白表達(dá)水平逐漸降低，具有劑量依賴性。與對(duì)照組相比25、50μmol/L組中COX-2、NF-кB、VEGF蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。COX-2、NF-кB、VEGF之間具有相關(guān)性(r分別為0.852，0.908和0.930P<0.01)。celecoxib對(duì)由bFGF誘導(dǎo)的BGC-823細(xì)胞中的COX-2、NF-кB、VEGF蛋白表達(dá)有抑制作用(P<0.01)。 結(jié)論：

9、 1、在胃癌BGC-823細(xì)胞中，bFGF經(jīng)P13K/PKB通路介導(dǎo)促進(jìn)增殖、抵抗無(wú)血清饑餓誘導(dǎo)的凋亡。 2、bFGF誘導(dǎo)胃癌BGC-823細(xì)胞PKB活性增高，其抑制劑wortmannin可阻斷此誘導(dǎo)作用。 3、bFGF依賴P13K/PKB通路促進(jìn)胃癌BGC-823細(xì)胞中COX-2、NF-кB、VEGF蛋白表達(dá)。 4、celecoxib可促進(jìn)胃癌BGC-823細(xì)胞的凋亡，降低胃癌BGC-823細(xì)胞中COX-