Ndfip1對奧沙利鉑誘導(dǎo)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用.pdf

1、研究表明，在帕金森病患者腦組織中發(fā)現(xiàn)有大量的神經(jīng)元發(fā)生程序性死亡，即細(xì)胞凋亡，有關(guān)實(shí)驗(yàn)證明，神經(jīng)細(xì)胞損傷后高表達(dá)的Ndfip1蛋白，可與Nedd4家族蛋白結(jié)合，通過泛素化清除錯(cuò)誤折疊的蛋白，進(jìn)而抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。本實(shí)驗(yàn)采用了人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SYSY細(xì)胞及過表達(dá)Ndfip1蛋白的SN-MC-1細(xì)胞作為研究對象，通過奧沙利鉑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，研究在Ndfip1蛋白過表達(dá)情況下對SH-SY5Y細(xì)胞增殖和凋亡的影響，探討Ndfip1對神經(jīng)細(xì)胞

2、的保護(hù)作用。
　　第一部分 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Ndfip1的SH-SY5Y細(xì)胞的鑒定。
　　首先通過對實(shí)驗(yàn)室凍存細(xì)胞的復(fù)蘇，傳代以獲得穩(wěn)定生長的SH-SY5Y和SN-MC-1細(xì)胞，同時(shí)通過Western Blot法對SN-MC-1細(xì)胞蛋白表達(dá)進(jìn)行鑒定，確認(rèn)獲得穩(wěn)定可控的Ndfip1蛋白表達(dá)，供本次實(shí)驗(yàn)所用，并通過細(xì)胞凍存，使得細(xì)胞株得以延續(xù)。
　　第二部分 Ndfip1對奧沙利鉑誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。
　

3、　首先，選取典型抗腫瘤藥物奧沙利鉑，作用于SH-SY5Y細(xì)胞，通過MTT比色法，鑒別經(jīng)不同藥物濃度及不同作用時(shí)間作用后對細(xì)胞生存率的影響情況，并對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，得出半數(shù)有效抑制濃度;然后通過加入4-HT誘導(dǎo)SN-MC-1細(xì)胞大量表達(dá)Ndfip1蛋白，經(jīng)MTT比色法可觀察到Ndfip1蛋白高表達(dá)后的SH-SY5Y細(xì)胞較野生型細(xì)胞增殖抑制率有所下降，推斷Ndfip1蛋白能夠?qū)箠W沙利鉑對SH-SY5Y細(xì)胞的增殖抑制作用。最后利用流式細(xì)胞儀技

4、術(shù)檢測單獨(dú)應(yīng)用奧沙利鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡水平，以及過表達(dá)的Ndfip1蛋白對奧沙利鉑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響，同時(shí)對兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果提示Ndfip1蛋白對奧沙利鉑誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用，同時(shí)檢測到凋亡蛋白Caspase-3表達(dá)的減少，進(jìn)一步表明Ndfip1蛋白可能通過抗凋亡作用實(shí)現(xiàn)其神經(jīng)保護(hù)作用。
　　綜上，本實(shí)驗(yàn)佐證了Ndfip1蛋白對神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用，表明其可能對帕金森病的治療具有潛在的正性作用，進(jìn)一步研究其抗