SDF-1對低氧誘導神經干細胞凋亡的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：采用三氣培養(yǎng)箱建立神經干細胞(NSCs)低氧損傷模型，觀察基質細胞衍生因子-1(SDF-1)是否對低氧誘導神經干細胞凋亡有保護作用，探討SDF-1是否能通過結合CXCR4受體拮抗低氧處理下神經干細胞的凋亡。
　　方法：采用小鼠C17.2神經干細胞系作為研究對象，用三氣培養(yǎng)箱模擬低氧環(huán)境，建立NSCs低氧損傷模型。第一部分：實驗分為正常對照組和低氧處理組；在0h、24h、48h、72h時間點分別運用噻唑藍（MTT）比色法觀察低

2、氧處理對NSCs的損傷，探討低氧對NSCs影響的適宜時間。在0h、24h、48h時間點用吖啶橙/溴化乙啶（AO/EB）熒光雙染法,顯微鏡觀察低氧狀態(tài)下細胞凋亡及形態(tài)學變化。用Western Blot檢測HIF-1α的表達。第二部分：實驗分為低氧培養(yǎng)組、SDF-1處理組，用MTT比色法檢測SDF-1處理下低氧處理NSCs的存活率。第三部分：實驗分為正常對照組、低氧對照組、低氧+SDF-1處理組、低氧+SDF-1+AMD3100組(CXCR

3、4阻斷劑)、低氧+AMD3100組，利用Western Blot檢測各組細胞CXCR4、bax、bcl-2蛋白的表達。
　　結果：第一部分，a. NSCs的存活率與形態(tài)：24h、48h、72h時間點低氧處理組比正常組存活率低(P<0.05)。顯微鏡下可見低氧培養(yǎng)組神經干細胞的數量較正常對照組明顯減少，并可觀察到晚期凋亡細胞。低氧培養(yǎng)72h組細胞存活率較低,低氧培養(yǎng)48h組比低氧培養(yǎng)24h組細胞凋亡較多,細胞活性較好,為實驗的最適宜

4、時間。
　　b. HIF-1α蛋白的表達:低氧培養(yǎng)24h組較正常組表達升高(P<0.05)，低氧培養(yǎng)48h組較正常組表達明顯升高(P<0.05)；
　　第二部分， NSCs的存活率：在低氧培養(yǎng)24h、48h條件下，加入SDF-1處理的低氧培養(yǎng)組與未加SDF-1的對照組相比較，細胞存活率均明顯升高（P<0.05）。
　　第三部分，各組細胞CXCR4、bax、bcl-2蛋白的表達:
　　CXCR4蛋白:低氧組CXCR

5、4蛋白的表達較正常對照組降低(P<0.05)，低氧+SDF-1處理組表達組比低氧組升高(P<0.05)。
　　bcl-2蛋白：低氧+SDF-1處理組較低氧組bcl-2蛋白表達升高(P<0.05)，低氧組bcl-2蛋白的表達較正常對照組降低(P<0.05)。
　　bax蛋白：低氧+SDF-1處理組較低氧組bax蛋白的表達降低(P<0.05)，低氧組bax蛋白的表達較正常對照組升高(P<0.05)。
　　結論：SDF-1可