神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)豚鼠順鉑毒性耳蝸的保護(hù)作用.pdf

1、授予單位代碼學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)柮?級(jí)鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目：作者姓名：學(xué)科門類：專業(yè)名稱：導(dǎo)師姓名、職稱：10 4 5 90 3 3 4 1 4 2 3神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)豚鼠順鉑毒性耳蝸的保護(hù)作用趙春紅醫(yī) 學(xué)耳鼻咽喉科學(xué)董明敏教授2 0 0 6 年5 月1 2 日鄭州大學(xué)2 0 0 6 年碩士畢業(yè)論文 神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)豚鼠順鉑毒性耳蝸的保護(hù)作用量顯著提高，且導(dǎo)致N G F 、B D N F 顯著提高，G D N F 產(chǎn)量減少到不可檢測(cè)水平

2、。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子在干細(xì)胞的表達(dá)是動(dòng)態(tài)調(diào)控的，可能受分化狀態(tài)的影響，并被細(xì)胞內(nèi)其他營(yíng)養(yǎng)因子的產(chǎn)量進(jìn)一步影響。目前，一種不明確的復(fù)雜的相互作用可能存在于營(yíng)養(yǎng)因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)耳蝸底轉(zhuǎn)N s c s 移植觀察對(duì)順鉑毒性耳蝸的保護(hù)作用；細(xì)胞移植組加用N G F 注射液和單純細(xì)胞移植組相比較觀察移植細(xì)胞在耳蝸的分布情況和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子N T ．3 在耳蝸的表達(dá)情況，從而評(píng)價(jià)N G F 對(duì)N s c s 遷移和耳蝸表達(dá)N T ．3 的影響。材

3、料與方法本實(shí)驗(yàn)分兩部分。第一部分：細(xì)胞培養(yǎng)從新生豚鼠( 2 4 h ) 海馬組織中機(jī)械分離得到N S c s 懸液，對(duì)其進(jìn)行傳代和誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞形態(tài)。傳代細(xì)胞用N e s t i n 免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定所培養(yǎng)細(xì)胞為N S C s ；誘導(dǎo)分化細(xì)胞分別用N s E 、G F A P 免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定N s c s 主要誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞；并用B r d U 標(biāo)記N S C s 以備移植用。第二部分

4、：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)選用健康、耳廓反應(yīng)靈敏、無(wú)中耳感染、A B R 測(cè)試雙耳聽力在2 0 ～3 0 d B 、體重2 0 0 ～3 0 0 克純白紅目豚鼠4 8 只作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。隨機(jī)分為血組。I 組：空白對(duì)照組。1 2 只( 2 4 耳) ，不施加任何處理因素。4 只用于A B R 閾值測(cè)試、耳蝸基底膜鋪片硝酸銀染色等觀察指標(biāo)的正常對(duì)照；4 只用于石蠟切片免疫組化染色觀察正常耳蝸組織中N T 一3 的表達(dá)情況；4 只用于R T —P c R 檢測(cè)

5、N T 一3m R N A 在正常耳蝸的表達(dá)情況。l I 組：?jiǎn)渭兌伒邹D(zhuǎn)打孔組。8 只( 1 6 耳) ，僅施以耳蝸底轉(zhuǎn)骨壁打孔術(shù)，不致聾、不注射N s c s 。分別于術(shù)前及術(shù)后第7 天、1 4 天測(cè)A B R ，‘觀察手術(shù)操作對(duì)聽力的影響，以及通過(guò)耳蝸基底膜鋪片硝酸銀染色觀察手術(shù)操作對(duì)聽毛細(xì)胞的損傷。I I I 組：致聾后耳蝸底轉(zhuǎn)注射生理鹽水組。1 2 只( 2 4 耳) ，術(shù)后4 周處死， 4 只用于耳蝸基底膜鋪片硝酸銀染色觀察

6、順鉑對(duì)聽毛細(xì)胞的損傷；4 只用于石蠟切片免疫組化染色觀察耳蝸組織中N T 一3 的表達(dá)情況；4 只用于R T —P c R 檢測(cè)N T 一3 m R N A 在耳蝸的表達(dá)情況。Ⅳ組：致聾后耳蝸底轉(zhuǎn)打孔注N s c s 組。8 只( 1 6 耳) ，經(jīng)耳蝸底轉(zhuǎn)骨壁打孔向內(nèi)耳注入B r d U 標(biāo)記的N s c s ，術(shù)后4 周處死，4 只用于石蠟切片B r d u 免疫組化染色觀察移植細(xì)胞在耳蝸的存活分布以及耳蝸組織N T 一3 的表達(dá)情