葉酸對(duì)體外缺氧新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:
　　研究葉酸(folicacid，F(xiàn)A)對(duì)體外培養(yǎng)的缺氧神經(jīng)干細(xì)胞(neuralstemcells，NSCs)增殖能力、凋亡率、抗氧化能力和線粒體通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，探討葉酸對(duì)體外缺氧NSCs的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。
　　方法:
　　采用無血清體外細(xì)胞培養(yǎng)方法，培養(yǎng)新生大鼠NSCs，將NSCs分為5組：
　?、僬?duì)照組(Normolcontrolgroup)葉酸濃度為4μg/ml；②缺氧模型組(Hy

2、poxiamodelgroup)葉酸濃度為4μg/ml；③缺氧葉酸低劑量組(Hypoxia+folicacidLgroup)葉酸濃度為81μg/ml；④缺氧葉酸高劑量組(Hypoxia+folicacidHgroup)葉酸濃度為44μg/ml；⑤缺氧葉酸缺乏組(Hypoxia+folicacidDgroup)葉酸劑量為0.65μg/ml；于增殖第3d將除正常對(duì)照組外的其他4組細(xì)胞進(jìn)行缺氧培養(yǎng)8h。用MTT法檢測缺氧損傷后神經(jīng)干細(xì)胞的活力

3、，繪制生長曲線；用ELISA試劑盒檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)液中同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)水平；用熒光分光光度計(jì)檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基(reactiveoxygenspecies，ROS)水平；培養(yǎng)6d后收集增殖期細(xì)胞，提取細(xì)胞蛋白，并采用試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)抗氧化指標(biāo)：超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathioneperoxidase，GSH-Px)和丙二醛(mal

4、eicdialdehyde，MDA)的水平；采用流式細(xì)胞儀檢測NSCs凋亡率和線粒體跨膜電位：采用Westernblot方法檢測各組細(xì)胞線粒體凋亡通路相關(guān)蛋白(Caspase-3、Bc1-2、Bax)表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　缺氧后NSCs形態(tài)學(xué)出現(xiàn)損傷跡象，葉酸可產(chǎn)生一定保護(hù)作用。MTT結(jié)果顯示，缺氧后各時(shí)間點(diǎn)，正常對(duì)照組細(xì)胞活力高于缺氧模型組和葉酸缺乏組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，缺氧葉酸高劑量組細(xì)胞活力高于缺氧葉

5、酸低劑量組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。ELISA測定各組NSCs培養(yǎng)液中的Hcy結(jié)果發(fā)現(xiàn)，葉酸添加組均低于正常對(duì)照組，且具有一定的劑量反應(yīng)關(guān)系。與正常對(duì)照組相比，缺氧模型組和缺氧葉酸缺乏組SOD、GSH-Px活性降低，MDA和ROS水平升高(P<0.05)；葉酸添加組SOD、GSH-Px活性升高，MDA和ROS水平降低(P<0.05)。流式細(xì)胞檢測結(jié)果顯示，缺氧模型組NSCs凋亡率高于正常對(duì)照組(P<0.05)和葉酸添加組，

6、低于葉酸缺乏組，線粒體跨膜電位水平低于正常對(duì)照組和葉酸添加組(P<0.05)，高于葉酸缺乏組；Westernblot方法測定各組NSCs內(nèi)線粒體通路相關(guān)蛋白的表達(dá)結(jié)果顯示，缺氧模型組活性Caspase-3和Bax表達(dá)量高于正常對(duì)照組和葉酸添加組(P<0.05)，低于葉酸缺乏組(P<0.05)，Bc1-2表達(dá)量低于正常對(duì)照組和葉酸添加組(P<0.05)，高于葉酸缺乏組(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　本實(shí)驗(yàn)成功建立體外新生S