脈沖強磁場對體外新生大鼠神經(jīng)干細胞分化的影響及機制研究.pdf

1、目的：探討脈沖強磁場對體外新生大鼠神經(jīng)干細胞分化的影響及可能機制。
　　方法：取新生3天以內(nèi)SD大鼠側(cè)腦室的神經(jīng)干細胞，在無血清條件下培養(yǎng)2周，后隨機分為實驗組和對照組。將實驗組置于脈沖強磁場實驗裝置內(nèi)，用前期研究獲得的促增殖參數(shù)（0.1HZ，4T，8次）進行干預(yù)處理，對照組置于相同條件下不行干預(yù)刺激。干預(yù)后24小時，兩組神經(jīng)干細胞均更換為含10％胎牛血清的培養(yǎng)基以誘導(dǎo)貼壁分化。貼壁分化后第7天，采用免疫熒光染色、RT-PCR技術(shù)

2、、western blot分別檢測兩組神經(jīng)干細胞分化后神經(jīng)元特異性標(biāo)志物 TUJ1、星形膠質(zhì)細胞特異性標(biāo)志物GFAP表達情況。并采用RT-PCR及Western blot技術(shù)進一步檢測實驗組和對照組wnt/β-catenin信號通路相關(guān)信號分子 Dvl1、β-catenin、GSK-3β、Tcf-4、CyclinD1、c-myc的表達情況。
　　結(jié)果：神經(jīng)干細胞干預(yù)后貼壁分化第7天，免疫熒光染色結(jié)果顯示：實驗組TUJ1陽性細胞表達

3、率較對照組增多，GFAP陽性細胞表達率較對照組減少；RT-PCR及Western Blot檢測結(jié)果顯示：實驗組TUJ1基因表達較對照組增多，GFAP較對照組降低。Western Blot結(jié)果與RT-PCR結(jié)果基本一致。進一步的RT-PCR和Western Blot結(jié)果顯示實驗組wnt/β-catenin通路相關(guān)信號分子Dvl1、β-catenin、Tcf-4、CyclinD1、c-myc表達均較對照組增高，而GSK-3β較對照組減少。<

4、br>　　結(jié)論：脈沖強磁場具有抑制神經(jīng)干細胞向星形膠質(zhì)細胞分化，并促進其向神經(jīng)元定向分化的作用；脈沖強磁場作用后的NSCs分化過程中存在wnt/β-catenin信號通路的激活，初步提示wnt/β-catenin信號通路在脈沖強磁場促NSCs分化過程中可能起作用。
　　第一部分脈沖強磁場對神經(jīng)干細胞分化的影響
　　目的:探討脈沖強磁場對體外新生大鼠神經(jīng)干細胞（NSCs）分化的影響。
　　方法:取新生3天以內(nèi)SD大鼠側(cè)腦

5、室的神經(jīng)干細胞，在無血清條件下培養(yǎng)2周，后隨機分為實驗組和對照組。將實驗組置于脈沖強磁場實驗裝置內(nèi)，用前期研究獲得的促增殖參數(shù)（0.1HZ，4T，8次）進行干預(yù)處理，對照組置于相同條件下不行干預(yù)刺激。干預(yù)后24小時，兩組神經(jīng)干細胞均更換為含10%胎牛血清的培養(yǎng)基以誘導(dǎo)貼壁分化。貼壁分化后第7天，采用免疫熒光染色、RT-PCR、western blot技術(shù)檢測兩組神經(jīng)干細胞分化后神經(jīng)元（TUJ1）及星形膠質(zhì)細胞（GFAP）相關(guān)特異性標(biāo)志物

6、的表達情況。
　　結(jié)果:神經(jīng)干細胞干預(yù)后貼壁分化第7天，免疫熒光染色示實驗組TUJ1陽性細胞率（33.4%±5.1%）較對照組（26.5%±7.0%）增多，實驗組 GFAP陽性細胞率（23.9%±5.0%）較對照組（36.2%±2.2%）減少(P<0.05)。RT-PCR檢測結(jié)果顯示：與對照組相比，實驗組的TUJ1基因表達增多，GFAP表達降低。Western Blot結(jié)果示：實驗組TUJ1的蛋白表達量（0.729±0.061）較

7、對照組（0.365±0.049）增多，GFAP的蛋白表達量（0.566±0.056）較對照組（1.034±0.051）減少。
　　結(jié)論:脈沖強磁場具有促進神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元分化，并抑制其向星形膠質(zhì)細胞分化的作用。
　　第二部分探討脈沖強磁場促神經(jīng)干細胞定向分化的可能機制
　　目的：探討wnt/β-catenin信號通路在脈沖強磁場促體外新生大鼠神經(jīng)干細胞定向分化中的可能作用。
　　方法：取新生3天以內(nèi)SD大鼠雙側(cè)

8、側(cè)腦室的神經(jīng)干細胞，在無血清條件下培養(yǎng)2周，后隨機分為實驗組和對照組。將實驗組置于脈沖強磁場實驗裝置內(nèi)，用前期研究獲得的促增殖參數(shù)（0.1HZ，4T，8次）進行干預(yù)處理，對照組置于相同條件下不行干預(yù)刺激。干預(yù)后24小時，兩組神經(jīng)干細胞均更換為含10%胎牛血清的培養(yǎng)基以誘導(dǎo)貼壁分化。貼壁分化后第7天，通過western blot及RT-PCR技術(shù)檢測神經(jīng)干細胞分化后wnt通路相關(guān)信號分子Dvl1、β-catenin、GSK-3β、Tcf-

9、4、CyclinD1、c-myc的表達情況。
　　結(jié)果：RT-PCR檢測結(jié)果顯示實驗組wnt信號通路相關(guān)信號分子Dvl1、β-catenin、Tcf-4、CyclinD1均較對照組增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Western Blot結(jié)果示實驗組wnt通路相關(guān)信號分子β-catenin、c-myc表達均較對照組增高，而GSK-3β較對照組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：脈沖強磁場作用后的NSCs分化過程中存在wnt/β-cat