維甲酸對新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞-前體細(xì)胞體外分化的影響.pdf

1、目的：本實驗研究ATRA(all trans.retinoic acid，全反式維甲酸)及聯(lián)合應(yīng)用BDNF(brain-derived neurotrophic factor，腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子)、GDNF(glial cellline-derived neurotrophic factor，膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子)對體外培養(yǎng)的新生大鼠NSCs/NPs(neural stem cells/neural precursors，神經(jīng)干細(xì)胞

2、/前體細(xì)胞)分化的影響。方法： 取新生SD大鼠(0-48 h)的前腦側(cè)腦室周圍腦組織(含SVZ，subventricular zone)或海馬(含SGZ，subgranular zone)，按NSCs/NPs的常規(guī)培養(yǎng)方法分離、培養(yǎng)。用免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定nestin(巢蛋白)、MAP-2(microtubule.associated protein 2，微管相關(guān)蛋白2)、GFAP(glial fibrillary acidic

3、protein，膠質(zhì)原纖維酸性蛋白)及MBP(myelinbasic protein，髓磷脂堿性蛋白)的表達(dá)，用免疫熒光雙染觀察nestin/GFAP、nestin/MAP-2的共表達(dá)，來觀察ATRA、BDNF、GDNF單獨或聯(lián)合應(yīng)用對次代神經(jīng)球細(xì)胞分化的作用。 結(jié)果： 1.單獨使用EGF(epidermic growth factor，表皮生長因子)、bFGF(basic fibroblastgrowth factor

4、，堿性成纖維細(xì)胞生長因子)或聯(lián)合使用EGF、bFGF對新生大鼠SVZ區(qū)及SGZ區(qū)原代分離細(xì)胞的增殖均有促進(jìn)作用，EGF反應(yīng)性神經(jīng)球的直徑大于bFGF反應(yīng)性神經(jīng)球的直徑，EGF+bFGF的作用優(yōu)于單獨使用EGF，SVZ區(qū)細(xì)胞對EGF的反應(yīng)性優(yōu)于SGZ區(qū)。 2.SVZ區(qū)EGF反應(yīng)性原代及次代神經(jīng)球均顯示nestin及GFAP陽性，免疫熒光雙染結(jié)果顯示有nestin/GFAP雙陽性細(xì)胞。 3.次代神經(jīng)球分化6～7天后，約9.0

5、24±0.71％的細(xì)胞呈MAP-2陽性，約29.86±8.41％的細(xì)胞呈GFAP陽性，另外，偶爾可見MBP陽性細(xì)胞，但大部分細(xì)胞仍呈nestin陽性(84.45±5.36％)。分化細(xì)胞中也可見nestin/GFAP共表達(dá)，但未見nestin/MAP-2共表達(dá)。 4.1 μM ATRA可促進(jìn)次代NSCs/NPs的分化，其中MAP-2陽性細(xì)胞的比例達(dá)29.14±5.00％，明顯高于對照組(7.19±1.21％)。.ATRA聯(lián)合應(yīng)用1

6、0 ng/ml的BDNF或GDNF，與單獨使用ATRA比較，并不顯著提高NSCs/NPs分化為MAP-2陽性細(xì)胞的比例。各組GFAP及nestin表達(dá)無差別。 結(jié)論： 1.新生大鼠SVZ區(qū)及SGZ區(qū)存在對EGF和/或bFGF起反應(yīng)的細(xì)胞，EGF的作用強于bFGF。 2.新生大鼠SVZ區(qū)存在EGF反應(yīng)性神經(jīng)干細(xì)胞/前體細(xì)胞。在自然分化條件下，分化細(xì)胞主要是膠質(zhì)細(xì)胞。 3.ATRA可以促進(jìn)新生大鼠SVZ區(qū)的E