人胚神經(jīng)干細胞體外分化的實驗研究.pdf

1、目的:神經(jīng)干細胞是近來神經(jīng)科學(xué)研究的一大熱點,其分化尤其是定向分化問題是熱點中的熱點.決定神經(jīng)干細胞分化方向的因素很多,近來研究發(fā)現(xiàn)很多細胞因子、神經(jīng)干細胞所處局部微環(huán)境、神經(jīng)干細胞本身產(chǎn)生的多種調(diào)控信號及某些特定基因均決定著神經(jīng)干細胞的分化方向.該研究對人胚神經(jīng)干細胞在成人腦脊液中的分化,及抗壞血酸的對其定向誘導(dǎo)分化作用進行了初步研究,并探討了其可能機制.方法:將體外原代培養(yǎng)的人胚來源的神經(jīng)干細胞置入含有正常成人腦脊液培養(yǎng)基(DMEM

2、/F12+B27+30％CSF)使其分化,在分化的不同時間點對分化的細胞進行免疫細胞化學(xué)染色,計數(shù)產(chǎn)生的各類神經(jīng)細胞的比例.將人胚中腦來源的神經(jīng)干細胞體外長期培養(yǎng),每隔5-7天傳代一次.取不同代數(shù)的神經(jīng)干細胞,種植入含有血清分化培養(yǎng)基(DMEM/F12+B27+10％胎牛血清)中或種植入含有一定濃度的抗壞血酸的分化培養(yǎng)基中(DMEM/F12+B27+10％胎牛血清+抗壞血酸)中,待其分化十天后,以免疫細胞化學(xué)方法觀測其分化細胞中TH(+