人胚神經(jīng)干細(xì)胞體外分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:神經(jīng)干細(xì)胞是近來(lái)神經(jīng)科學(xué)研究的一大熱點(diǎn),其分化尤其是定向分化問(wèn)題是熱點(diǎn)中的熱點(diǎn).決定神經(jīng)干細(xì)胞分化方向的因素很多,近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)很多細(xì)胞因子、神經(jīng)干細(xì)胞所處局部微環(huán)境、神經(jīng)干細(xì)胞本身產(chǎn)生的多種調(diào)控信號(hào)及某些特定基因均決定著神經(jīng)干細(xì)胞的分化方向.該研究對(duì)人胚神經(jīng)干細(xì)胞在成人腦脊液中的分化,及抗壞血酸的對(duì)其定向誘導(dǎo)分化作用進(jìn)行了初步研究,并探討了其可能機(jī)制.方法:將體外原代培養(yǎng)的人胚來(lái)源的神經(jīng)干細(xì)胞置入含有正常成人腦脊液培養(yǎng)基(DMEM

2、/F12+B27+30％CSF)使其分化,在分化的不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)分化的細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色,計(jì)數(shù)產(chǎn)生的各類神經(jīng)細(xì)胞的比例.將人胚中腦來(lái)源的神經(jīng)干細(xì)胞體外長(zhǎng)期培養(yǎng),每隔5-7天傳代一次.取不同代數(shù)的神經(jīng)干細(xì)胞,種植入含有血清分化培養(yǎng)基(DMEM/F12+B27+10％胎牛血清)中或種植入含有一定濃度的抗壞血酸的分化培養(yǎng)基中(DMEM/F12+B27+10％胎牛血清+抗壞血酸)中,待其分化十天后,以免疫細(xì)胞化學(xué)方法觀測(cè)其分化細(xì)胞中TH(+