胚胎神經(jīng)干細胞和聽囊細胞體外分化的實驗研究.pdf

1、目的：研究胚胎神經(jīng)干細胞和聽囊細胞體外分化為毛細胞的潛能；探討胚胎神經(jīng)干細胞在內(nèi)耳再生研究領(lǐng)域的價值。
　　 方法：分離孕9.5-10.5天C5786/L小鼠胚胎的后腦區(qū)域的神經(jīng)管組織和聽囊組織，采用無血清培養(yǎng)，進行體外培養(yǎng)、擴增，并通過免疫熒光化學(xué)染色（巢蛋白）進行鑒定。取傳至第4代神經(jīng)干細胞和聽囊細胞，接種于蓋玻片上。添加血清培養(yǎng)基，培養(yǎng)15天后行免疫熒光檢測，與RT-PCR檢測。觀察神經(jīng)干細胞和聽囊細胞的體外分化特點。

2、r>　　 結(jié)果：采用無血清培養(yǎng)法成功地培養(yǎng)出胚胎神經(jīng)干細胞球和聽囊細胞球，采用神經(jīng)球分析法收集細胞球進行純化與傳代，免疫熒光檢測示：來源于神經(jīng)管和聽囊的細胞球巢蛋白（nestin）表達陽性，證實其都具有神經(jīng)干細胞的特點。添加含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)15天后，免疫熒光檢測證實所獲得的神經(jīng)干細胞和聽囊細胞均可以在體外分化為表達毛細胞標記物MyosinⅦa的細胞。
　　 結(jié)論：胚胎神經(jīng)干細胞和聽囊細胞能夠在體外培養(yǎng)的條件下分化為毛細胞樣細胞