神經(jīng)干細胞與腦腫瘤干細胞體外培養(yǎng)的生長特性比較.pdf

1、【目的】探索人胚神經(jīng)干細胞及膠質(zhì)瘤腫瘤干細胞體外分離培養(yǎng)的條件，并觀察比較其在體外分離培養(yǎng)的生長特性。用CDl33免疫磁珠分選陽性細胞后為進一步研究提供材料。 【方法】神經(jīng)干細胞：取米非司酮流產(chǎn)8．12周胎齡的人胚胎，從胎腦皮層分離組織，采用胰蛋白酶消化和機械吹打的方法獲得單細胞懸液。采用無血清培養(yǎng)基(DMEM／F12)，加入EGF和bFGF(20ng／m1)細胞因子和N2添加劑刺激細胞增殖，從而進行體外擴增培養(yǎng)、連續(xù)傳代。添加

2、10％胎牛血清誘導分化，免疫細胞化學鑒定神經(jīng)干細胞(Nestin)和分化成熟的神經(jīng)元(NSE)、星形膠質(zhì)細胞(GFAP)及少突膠質(zhì)細胞(CNP)。膠質(zhì)瘤腫瘤干細胞：將SHG44細胞系和人腦膠質(zhì)瘤手術(shù)標本采用胰蛋白酶消化獲得單細胞，用CDl33免疫磁珠分離陽性細胞、之后分別應用無血清培養(yǎng)基(DMEM／F12，添加bFGF、EGF)培養(yǎng)。形成腫瘤球后用添加10％胎牛血清誘導分化，免疫細胞化學染色檢測腫瘤球細胞及其分化細胞中的Nestin、N

3、SE、GFAP陽性細胞。神經(jīng)干細胞和腫瘤干細胞在下一步應用之前均行CDl33免疫磁珠復選。同一時間點行流式細胞儀檢測細胞周期，比較增殖活力。 【結(jié)果】從人胎腦分離的細胞培養(yǎng)在含有EGF和bFGF的無血清培養(yǎng)基中，能形成大量的神經(jīng)干細胞球，這些神經(jīng)干細胞球可在體外擴增及傳代培養(yǎng)。免疫細胞化學鑒定神經(jīng)干細胞球中大部分為Nestin表達陽性細胞。這些細胞球貼壁分化后可以出現(xiàn)NSE、GFAP和CNP表達陽性的細胞。膠質(zhì)瘤細胞系、組織中分

4、選出的CDl33陽性細胞在上述條件下培養(yǎng)也出現(xiàn)呈球形聚集生長，同神經(jīng)干細胞亦能多向分化。流式結(jié)果顯示腦腫瘤干細胞較神經(jīng)干細胞多處于增殖期。 【結(jié)論】從引產(chǎn)的人胚胎腦皮層分離出的細胞，在含有EGF和bFGF的無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)，見到了具有自我更新能力和多向分化潛能的神經(jīng)干細胞，其含有CDl33陽性細胞。膠質(zhì)瘤細胞系及手術(shù)組織中含有CDl33陽性細胞，在與神經(jīng)干細胞相同的培養(yǎng)條件下，可以增殖和多向分化，具有干細胞特性。腦腫瘤干細胞的