新生SD大鼠海馬神經(jīng)干細胞體外培養(yǎng)、冷凍復(fù)蘇及誘導(dǎo)分化后鉀通道的變化.pdf

1、神經(jīng)干細胞(neural stem cells, NSCs)的發(fā)現(xiàn)是在研究造血發(fā)生和神經(jīng)發(fā)育的基礎(chǔ)上開始的。研究結(jié)果顯示，胚胎和成人腦組織中均存在NSCs。它強大的增殖能力使得NSCs易于在體外大量繁殖，在體內(nèi)移植時常常具有低免疫原性，因此在臨床治療中具有廣闊的應(yīng)用前景。
　　本文選擇的實驗材料為新生 SD(sprague-dawley)大鼠，首先探討了NSCs的體外分離、培養(yǎng)及鑒定的方法。無菌條件下分離出大鼠的海馬組織，采用無血

2、清培養(yǎng)法進行培養(yǎng)。研究結(jié)果表明，以5×105個/mL的細胞密度接種到培養(yǎng)瓶中，傳代后的細胞生長穩(wěn)定，經(jīng)免疫熒光鑒定均為Nestin陽性。建立了一種快速獲得 NSCs的體外培養(yǎng)及鑒定系統(tǒng)。
　　在此基礎(chǔ)上，以DMEM/F12培養(yǎng)基、二甲基亞砜 DMSO、胎牛血清 FBS作為主要成分，設(shè)計了不同配比的凍存保護液，對 NSCs冷凍保存進行了研究。分別凍存1周、2周及1個月后臺盼藍染色檢測其復(fù)蘇率，結(jié)果顯示 D10組(70％ DMEM/F

3、12+20％ FBS+10％ DMSO)作為凍存保護液，復(fù)蘇率分別為(54.00±1.73)％，(59.00±1.16)％，(58.00±2.08)％，顯著優(yōu)于其余各組，且復(fù)蘇后不影響其原有的生物學(xué)特性。
　　此外，本文還對 NSCs誘導(dǎo)分化后不同天數(shù)的鉀通道的變化進行了研究。將培養(yǎng)的第3代 NSCs進行誘導(dǎo)分化，對 NSCs以及誘導(dǎo)分化后的神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞進行免疫熒光鑒定，并用全細胞膜片鉗記錄其分化5 d,10 d,15 d