Bax-抑制肽對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用.pdf

1、目的:通過檢測(cè)應(yīng)用Bax-抑制肽對(duì)新生鼠缺血缺氧性腦損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的療效，探討B(tài)ax-抑制肽對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　 方法:選取200只7日齡新生Wister大鼠為研究對(duì)象，隨機(jī)分為以下三組:假手術(shù)組;對(duì)照組;實(shí)驗(yàn)組（bax-抑制肽）。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組分別通過結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈以及置于8％的氮氧混合氣中2小時(shí)建立新生鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)模型，假手術(shù)組僅游離左側(cè)頸總動(dòng)脈，不結(jié)扎，不低氧處理。實(shí)驗(yàn)組

2、于建立模型后0h、6h、12h、24h、48h、3d不同時(shí)間點(diǎn)側(cè)腦室注射bax-抑制肽5ug(5ul)，其余兩組予相同劑量生理鹽水于相同時(shí)間點(diǎn)側(cè)腦室注射。對(duì)照組和假手術(shù)組于HIBD模型建立后第12h、24h、2d、3d、7d及實(shí)驗(yàn)組HIBD后第7d每組取2只甲醛灌注后斷頭取腦海馬組織病理檢測(cè)，另取6只新鮮腦組織進(jìn)行蛋白免疫印跡法(Weston blot)檢測(cè)活性Caspase-3蛋白、逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)測(cè)定Caspase-3m

3、RNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:1、HE染色組織顯示:在患側(cè)海馬區(qū)，實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組0h、6h、12h、24h、48h各亞組均有病理性損傷，實(shí)驗(yàn)組病理損傷程度低于對(duì)照組，在72h亞組實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組病理損傷無明顯差異。2、Western blot檢測(cè)Caspase-3蛋白及RT-PCR檢測(cè)Caspase-3mRNA:對(duì)照組與假手術(shù)組比較，對(duì)照組在HIBD后0h、6h、12h、24h海馬區(qū)Caspase-3及mRNA依次增多，24h達(dá)高峰

4、，48h開始下降，7d時(shí)達(dá)到基礎(chǔ)水平。3、HIBD后7d Western blot檢測(cè)Caspase-3:實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組在0h、6h、12h、24h、48h各亞組比較，海馬區(qū)Caspase-3明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在72h亞組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組各亞組間比較，HIBD后越早注射bax-抑制肽，Caspase-3越少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、HIBD后7d RT-PCR檢測(cè)Caspase-3mRNA:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在0h、6h

5、、12h、24h、48h各亞組比較，患側(cè)海馬區(qū)活性Caspase-3明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在72h亞組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組各亞組間比較，HIBD后越早注射bax-抑制肽，Caspase-3mRNA量越少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:1、新生大鼠缺氧缺血腦組織Caspase-3及mRNA表達(dá)增多，神經(jīng)細(xì)胞凋亡增加，24小時(shí)達(dá)高峰，48小時(shí)后逐漸下降。2、HIBD后2天內(nèi)側(cè)腦室注射bax-抑制肽可減少Caspase