?；撬釋?duì)缺血性神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用及作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:探討牛磺酸對(duì)大鼠離體和在體腦缺血所致神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及可能的作用機(jī)制。 方法：1.牛磺酸對(duì)大鼠在體腦缺血性損傷保護(hù)作用研究：大鼠局灶性腦缺血模型采用持續(xù)性大腦中動(dòng)脈線栓法(permanentmiddlecerebralarteryocclusion,pMCAO)制備。動(dòng)物隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血模型組和?；撬?250mg/Kg.d，×7d)治療組，持續(xù)缺血3h時(shí)開始觀測(cè)各組的神經(jīng)行為變化，6h后取腦，紅四氮唑染色(2,

2、3,5-triphenyltetrazolium，TTC)測(cè)腦梗死體積，分光光度法測(cè)腦組織內(nèi)氧化/抗氧化損傷指標(biāo)如丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活性的變化，免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)與缺血后炎癥反應(yīng)相關(guān)的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducednitricoxidesynthetase,iNOS)和細(xì)胞間粘附分子1(inter-cellularadhesionm

3、olecule-1，ICAM-1)表達(dá)的變化；并采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(real-timefluorescencequantitativereversetranscriptase-polymerasechainreaction,real-timeFQRT-PCR)檢測(cè)腦組織內(nèi)caspase-3/8和蛋白激酶C-gamma(gammasubunitofproteinkinaseC，PKCγ)mRNA表達(dá)；2.牛磺酸對(duì)大鼠離體腦缺血

4、性損傷保護(hù)作用研究：離體腦缺血模型采用大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元的氧糖剝奪模型(oxygen-glucosedeprivation,OGD)。觀察?；撬?終濃度為20mM、10mM和5mM)對(duì)OGD誘導(dǎo)的急性神經(jīng)元損傷如MTT還原反應(yīng)和乳酸脫氫酶釋放(lactatedehydrogenase，LDH)的影響，并采用流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry,FCM)檢測(cè)其對(duì)早期神經(jīng)元凋亡的影響；進(jìn)一步通過(guò)檢測(cè)神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣(intracellular

5、calciumconcentrations，[Ca2+]i)和胞外氨基酸水平的變化來(lái)探討?；撬岬纳窠?jīng)保護(hù)作用機(jī)制； 結(jié)果：1.牛磺酸可改善大鼠持續(xù)性大腦中動(dòng)脈缺血引起的神經(jīng)行為障礙，減少相應(yīng)腦區(qū)梗死體積；2.可提高腦組織SOD活性，但對(duì)MDA水平無(wú)明顯影響；3.明顯減少腦血管內(nèi)皮ICAM-1的表達(dá)，但對(duì)腦組織NOS含量及表達(dá)未見明顯影響；4.可減輕OGD引起的急性神經(jīng)元損傷，減少LDH釋放；5.可抑制OGD引起的神經(jīng)元內(nèi)鈣超載以