N-cadherin介導(dǎo)GDNF對DA能神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)能有效地保護(hù)中腦黑質(zhì)多巴胺(DA)能神經(jīng)細(xì)胞，為帕金森病(PD)的治療帶來了希望。GDNF發(fā)揮生物學(xué)作用要經(jīng)膜受體介導(dǎo)，已知的GDNF受體有配體結(jié)合受體GDNF家族受體α1(GFRα1)和跨膜傳遞信息的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)受體RET，NCAM-140，Integrinβ1。已經(jīng)觀察到，在干擾了N-cadherin的表達(dá)后，GDNF對DA能神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用減弱。本研究旨在進(jìn)一步證實(shí)N-cadherin是否

2、也能夠作為另一個GDNF的跨膜信號受體。
　　 方法:MN9D細(xì)胞分三組：GDNF組，在培養(yǎng)基中加入GDNF(50 ng/ml)；PBS組，在培養(yǎng)基中加入PBS(5 μl/ml)；空白對照組，不做處理。SD大鼠分三組：GDNF組，大鼠腦右側(cè)黑質(zhì)致密部定位注射GDNF(100 ng/4 μl)；PBS組，大鼠腦右側(cè)黑質(zhì)致密部定位注射PBS 4 μl；空白對照組，不做處理。用免疫共沉淀，免疫印跡等方法檢測RET， NCAM-140，

3、Integrinβ1，N-cadherin，GDNF，GFRα1的表達(dá)。
　　 結(jié)果:同一組樣品用anti-NCAM, anti-N-cadherin, anti-RET和anti-integrinβ1一抗的免疫共沉淀結(jié)果顯示，未破壞脂筏時，GDNF和GDNF-GFRα1均能被檢測到。破壞脂筏后，只在用anti-RET以及anti-N-cadherin一抗的樣品中檢測到GDNF，同時只在用anti-RET一抗的樣品中檢測到GDN

4、F-GFRα1。破壞脂筏后，不同組樣品用anti-RET或anti-N-cadherin一抗的免疫共沉淀結(jié)果顯示， GDNF組GDNF的水平最高；而用anti-GDNF一抗的免疫共沉淀結(jié)果顯示，GDNF組N-cadherin或RET的水平最高。免疫印跡的結(jié)果顯示， RET和NCAM-140在脂筏上的表達(dá)GDNF組最高；integrinβ1在脂筏上的表達(dá)各組間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；N-cadherin在脂筏上未檢測到。
　　 結(jié)論: