GDNF與17β-Estradiol協(xié)同保護(hù)6-OHDA損傷的DA能神經(jīng)細(xì)胞的作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:研究膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(glia cell line-derived neurotrophicfactor,GDNF)與17β-Estradiol(E2)協(xié)同保護(hù)中腦黑質(zhì)多巴胺(dopamine,DA)能神經(jīng)細(xì)胞的作用,并探討PI3-K/Akt信號(hào)通路介導(dǎo)其協(xié)同保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　 方法:本研究以培養(yǎng)的新生1～3天的SD大鼠中腦黑質(zhì)腦片為研究對(duì)象,腦片培養(yǎng)至7天時(shí),碘化丙啶(PI)染色檢測(cè)培養(yǎng)腦片中細(xì)胞的活力

2、,并取細(xì)胞活力良好的腦片做后續(xù)實(shí)驗(yàn)。首先以200μmol/L6-羥多巴胺(6-OHDA)作用于已培養(yǎng)7天的腦片1小時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞損傷,然后將培養(yǎng)的腦片分為8組:正常對(duì)照組、溶劑對(duì)照組、GDNF組、E2組、GDNF+E2組、Wortmannin(PI3-K特異性阻斷劑)+GDNF組、Wortmannin+E2組、Wortmannin+GDNF+E2組,各組腦片再培養(yǎng)15min后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),其中Wortmannin在GDNF或(和)E2加入前

3、1小時(shí)加入。免疫熒光雙標(biāo)染色觀察黑質(zhì)致密部(substantia nigracompacta,SNc)中酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)與Akt共表達(dá)情況;Western Blot方法檢測(cè)TH、p-Akt、Bcl-2、Bad、Procaspase-3的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:中腦腦片培養(yǎng)至第7天時(shí),可見(jiàn)邊緣細(xì)胞清晰并有長(zhǎng)的突起伸出,貼壁良好,PI染色結(jié)果顯示細(xì)胞活力較好;免疫熒光染色結(jié)果顯示腦片SN

4、c中有TH+細(xì)胞;免疫熒光雙標(biāo)染色結(jié)果顯示SNc中所有TH+細(xì)胞均表達(dá)Akt,TH+/Akt+細(xì)胞為胞漿著色;Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示在GDNF+E2組,TH的表達(dá)比單用GDNF或E2時(shí)顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);GDNF+E2組中Bcl-2、Procaspase-3的表達(dá)比單用GDNF或E2時(shí)增高,而B(niǎo)ad的表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);GDNF、E2及GDNF+E2組中Akt磷酸化水平都是升

5、高的,與相應(yīng)的溶劑對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);所有加入Wortmannin組與相應(yīng)的未加Wortmannin各組相比,TH、Bcl-2、Procaspase-3的表達(dá)是降低的,Bad的表達(dá)是升高的,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:在本實(shí)驗(yàn)條件下,GDNF與E2對(duì)DA能神經(jīng)細(xì)胞有協(xié)同保護(hù)作用;PI3-K/Akt信號(hào)通路介導(dǎo)了GDNF與E2的協(xié)同保護(hù)作用,其機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)節(jié)其下游的凋亡調(diào)控因子Bcl