黃角顆粒對神經(jīng)細胞損傷的保護作用及其機制的實驗研究.pdf

1、目的：黃角顆粒是武漢市一醫(yī)院治療中風急性期痰熱腑實證的經(jīng)驗方，臨床觀察療效確切，動物實驗也證實其有改善血液流變學、拮抗凋亡的作用，本試驗旨在從離體細胞水平探討黃角顆粒含藥血清對神經(jīng)細胞(SH-SY5Y)缺血缺氧損傷模型是否具有保護作用；并尋找其具有神經(jīng)保護作用的最佳藥物血清濃度；在最佳藥物血清濃度下進一步證實黃角顆粒含藥血清對缺血缺氧神經(jīng)細胞保護作用的機制，在于其對缺血缺氧細胞凋亡的抑制作用。 方法： 1.實驗動物分組后

2、分別灌胃給藥采血，制備黃角顆粒含藥血清和空白對照血清。 2.連續(xù)培養(yǎng)的人神經(jīng)母細胞瘤細胞株(SH-SY5Y)細胞的培養(yǎng)及傳代，復制神經(jīng)細胞缺血缺氧模型并分別用不同的血清和不同的血清藥物濃度進行干預(yù)。 3.用MTT微量比色法檢測細胞活性，比較不同的血清對細胞的保護作用和不同的濃度的血清對細胞的保護作用的差別。 4.用AnnexinV/PI雙標記法流式細胞技術(shù)，在最佳血清藥物濃度下檢測細胞凋亡。 結(jié)果：

3、 1.缺氧造模致使神經(jīng)細胞損傷在10％黃角顆粒血清和10％空白對照血清兩組的缺氧培養(yǎng)與正常培養(yǎng)的比較中，缺血缺氧培養(yǎng)的細胞的活性顯著低于正常培養(yǎng)組(P<0.01)，說明在經(jīng)歷了15Min的無血清、缺氧造模培養(yǎng)后細胞活性下降，部分神經(jīng)元死亡。 2.黃角顆粒對神經(jīng)細胞損傷的保護作用在10％的黃角顆粒含藥血清和空白對照血清對缺血缺氧神經(jīng)細胞的保護作用的比較中，以(OD正常培養(yǎng)組-OD缺氧培養(yǎng)組)/OD正常培養(yǎng)組計算細胞的死亡率，黃角

4、顆粒含藥血清組的細胞死亡率明顯低于空白對照組(P<0.01)，證實了其降低細胞死亡率的神經(jīng)保護作用。 3.不同血清濃度梯度的神經(jīng)保護作用的比較用5％、10％、20％、40％各不同濃度的含藥血清對缺氧細胞進行干預(yù)的比較中，以20％組、40％組的保護作用顯著優(yōu)于其他組(P<0.05)，但是這兩組之間沒有顯著區(qū)別(P>0.05)，提示黃角顆粒發(fā)揮神經(jīng)保護作用的最佳血清濃度是20％。 4.黃角顆粒對神經(jīng)細胞凋亡的抑制作用用最佳血

5、清濃度20％的黃角顆粒血清和空白對照血清分別對缺氧造模細胞進行干預(yù)后，用AnnexinV-FITC/PI雙標記法流式細胞儀對細胞的凋亡進行定量檢測。流式細胞儀分析結(jié)果顯示經(jīng)歷了15Min短暫的缺氧培養(yǎng)造模細胞的損傷的形式包括壞死和凋亡，凋亡是其死亡的重要形式；與同濃度的空白血清相比，黃角顆粒含藥血清組細胞的凋亡率明顯下降，說明對黃角顆粒神經(jīng)細胞缺血缺氧的保護作用在于減少細胞的凋亡。 結(jié)論: 1.與空白對照血清相比黃角顆粒