雌激素保護(hù)6-OHDA損傷的多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞的機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究雌激素(E2)經(jīng)何種受體-雌激素受體α(Erα)和/或雌激素受體β(Erβ)-保護(hù)中腦黑質(zhì)致密部(pars compacta of substantia nigra,SNc)的多巴胺(dopamine,DA)能神經(jīng)細(xì)胞,并探討PI3-K/Akt信號(hào)通路介導(dǎo)其作用的可能性。
　　 方法:本研究以體外培養(yǎng)的新生1～3天的SD大鼠中腦黑質(zhì)腦片為研究對(duì)象,培養(yǎng)7天后采用免疫熒光雙標(biāo)染色觀(guān)察DA能神經(jīng)細(xì)胞中Erα、Erβ的表達(dá)情

2、況;在此基礎(chǔ)上,再將培養(yǎng)的腦片分組:正常對(duì)照組和6-羥多巴胺(6-OHDA)組(200μmol/L),6-OHDA組又分為:E2組、Wortmannin(PI3-K特異性阻斷劑)+E2組、雌激素受體α激動(dòng)劑(PPT)組、Wortmannin+PPT組、雌激素受體β激動(dòng)劑(DPN)組、Wortmannin+DPN組,6-OHDA作用于腦片1小時(shí)后加入Wortmannin,再1小時(shí)后分別加入E2、PPT、DPN,15min后收集腦片,wes

3、tern blot方法檢測(cè)酪氨酸羥化酶(TH)、p-Akt、Bcl-2、Bad、procaspase-3在黑質(zhì)的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:中腦腦片培養(yǎng)至第7天時(shí),可見(jiàn)腦片邊緣的細(xì)胞清晰,細(xì)胞邊緣有長(zhǎng)的突起爬出,貼壁良好。免疫熒光染色結(jié)果顯示腦片SNc中有TH+細(xì)胞。免疫熒光雙標(biāo)染色結(jié)果顯示SNc中所有TH+細(xì)胞均表達(dá)有Erα、Erβ,TH+/Erα+、Erβ+均為胞漿著色。Western blot方法檢測(cè)TH、p-Akt、Bcl-

4、2、procaspase-3的表達(dá)在E2、PPT及DPN組與對(duì)照組相比顯著升高,而B(niǎo)ad的表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);同時(shí)觀(guān)察到PPT組較DPN組作用顯著,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);阻斷劑組與相應(yīng)的未加阻斷劑組相比,TH、Bcl-2、(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:在本實(shí)驗(yàn)條件下,雌激素、PPT及DPN對(duì)多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞均有保護(hù)作用,PPT的保護(hù)作用較DPN顯著,即Erα在保護(hù)多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞中發(fā)揮主