大鼠出生前后黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)細胞的發(fā)育.pdf

1、目的:觀察大鼠出生前后(從胚胎期第16天至出生后第21天)黑質(zhì)致密部(SNc)多巴胺(DA)能神經(jīng)細胞的發(fā)育。 方法:采用SD大鼠為實驗動物，分別觀察胚胎期第16天(E16)、E18、E20、出生后第1天(P1)、P3、P7、P14、P21共八個時間點SNc神經(jīng)細胞酪氨酸羥化酶(TH)的表達。 (1)取每個時間點的SD大鼠(n=6)SNc組織勻漿，采用RT-PCR方法檢測SNc的TH-mRNA水平。 (2)取每個

2、時間點的SD大鼠(n=6)SNc組織勻漿，采用Wlestem-blot方法檢測SNc的TH蛋白水平。所得電泳條帶均用ImageJ軟件進行處理。 (3)取每個時間點的SD大鼠(n=6)SNc區(qū)段，石蠟包埋，行連續(xù)冠狀切片，采用免疫組織化學(xué)的方法，用抗TH抗體標(biāo)記SNc的DA能神經(jīng)細胞，分別計數(shù)SNc全程的DA能神經(jīng)細胞面數(shù)密度和SNc嘴側(cè)段、中間段、尾側(cè)段三段的DA能神經(jīng)細胞面數(shù)密度(等面積上的TH陽性細胞數(shù))。結(jié)果均行統(tǒng)計學(xué)分析

3、。 結(jié)果: (1) SNc的TH-mRNA表達結(jié)果：SNc的TH-mRNA表達在E16時較低，隨著發(fā)育，TH-mRNA表達先呈現(xiàn)逐漸上升趨勢，至P1時上升到較高水平；后呈現(xiàn)下降趨勢，至P3時下降到較低值。此后，TH-mRNA表達又呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢，至P14時上升到最高水平，P14之后無明顯變化。 (2)SNc的TH蛋白表達結(jié)果：SNc的TH蛋白表達在E16時較低，隨著發(fā)育，TH蛋白表達先呈現(xiàn)逐漸上升趨勢，至P1

4、時上升到較高水平；后呈現(xiàn)下降趨勢，至P3時降低到接近E16的水平。此后TH蛋白表達又呈現(xiàn)逐漸上升趨勢，于P14達最高值，P14后無明顯變化。這與TH-mRNA表達水平的檢測結(jié)果一致。 (3)SNc全程的DA能神經(jīng)細胞面數(shù)密度：將SNc作為一個整體，其全程的DA能神經(jīng)細胞面數(shù)密度在E16時較低，隨著發(fā)育，SNc全程的DA能神經(jīng)細胞面數(shù)密度先呈現(xiàn)逐漸增加趨勢，至P1時增加到較高水平；后呈現(xiàn)急劇下降趨勢，在P3時下降到最低值。此后DA

5、能神經(jīng)細胞面數(shù)密度又呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢，于P14增加到最高值，P14之后無明顯變化。 (4)SNc嘴側(cè)、中間、尾側(cè)三段的DA能神經(jīng)細胞面數(shù)密度：嘴側(cè)段DA能神經(jīng)細胞面數(shù)密度，在E16時較低，隨著發(fā)育，嘴側(cè)段DA能神經(jīng)細胞面數(shù)密度逐漸增加，至E20時達到最大值，此后出現(xiàn)逐漸下降趨勢，在P7時下降到最低值，P7之后不再有明顯改變；中間段，在E16時較低，隨著發(fā)育，DA能神經(jīng)細胞面數(shù)密度先呈現(xiàn)逐漸增加趨勢，至P7時達最大值，后呈現(xiàn)下降

6、趨勢，在P14時下降到較低水平，P14之后無明顯變化；尾側(cè)段，在E16時較低，隨著發(fā)育，尾側(cè)段DA能神經(jīng)細胞面數(shù)密度先呈現(xiàn)逐漸增加趨勢，在P1時增加到較高水平；后呈現(xiàn)急劇下降趨勢，在P3時降到最低值。此后又出現(xiàn)急劇增加的趨勢，至P7時達最高值，P7之后無明顯變化。 結(jié)論: (1)大鼠出生前后SNc的TH表達先呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢，后呈現(xiàn)下降趨勢，在P3時下降到較低值。此后又逐漸增加，至P14達到最高值，P14之后不再有明顯