甘丙肽對(duì)離體海馬神經(jīng)細(xì)胞損傷模型的保護(hù)作用研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)通過(guò)運(yùn)用離體培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞，觀察過(guò)氧化氫(H2O2)和谷氨酸(Glu)對(duì)海馬神經(jīng)細(xì)胞的損傷效應(yīng)及GAL在海馬神經(jīng)細(xì)胞損傷過(guò)程中的保護(hù)作用，并初步探討這種作用的產(chǎn)生機(jī)理。實(shí)驗(yàn)共分為三部分：　　第一部分，選取新生大鼠分離雙側(cè)海馬細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，并通過(guò)阿糖胞苷(Ara-C)處理得到較純的海馬神經(jīng)細(xì)胞。用免疫組化ABC法對(duì)海馬神經(jīng)細(xì)胞特性進(jìn)行鑒定并檢測(cè)GAL陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞，用RT-PCR方法來(lái)檢測(cè)GAL三種受體mRNA的表達(dá)?！　?/p>

2、第二部分，建立離體培養(yǎng)海馬神經(jīng)細(xì)胞的損傷模型。采用一系列濃度的過(guò)氧化氫和谷氨酸損傷海馬神經(jīng)細(xì)胞，通過(guò)MTT法檢測(cè)細(xì)胞的存活率?！　〉谌糠郑珿AL的保護(hù)作用。觀察GAL，GAL的激動(dòng)劑GAL1-11、GAL2-¨對(duì)損傷細(xì)胞的作用。用GAL非特異性拮抗劑M35觀察其是否阻斷GAL及其激動(dòng)劑的作用，并用Fura-2標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)游離鈣的方法探討GAL可能的受體作用機(jī)制及胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1)經(jīng)過(guò)上述分離與純化細(xì)胞

3、的方法，我們成功地獲得能在體外穩(wěn)定生長(zhǎng)的海馬神經(jīng)細(xì)胞。體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)GAL蛋白，并表達(dá)GAL受體GalR2和GalR3的mRNA，但不表達(dá)GalR1的mRNA。 2)H2O2濃度為0.2mM及以上劑量，Glu濃度為0.3mM以上劑量均能顯著降低海馬神經(jīng)細(xì)胞的存活率，并且隨著H2O2和Glu濃度的增加，細(xì)胞的存活率不斷降低。 3)各個(gè)濃度的GAL、GAL1-11和GAL2-11均能顯著提高海馬神經(jīng)細(xì)胞的存活率。

4、GAL非特異性受體拮抗劑M35能夠明顯拮抗GAL、GAL1-11和GAL2-11對(duì)海馬神經(jīng)細(xì)胞的這種作用。另外，GAL能顯著降低受損海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的游離鈣離子濃度。 綜上所述，從新生SD大鼠的海馬分離純化得到了較純的海馬神經(jīng)細(xì)胞，利用這種細(xì)胞建立損傷模型，并研究GAL對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果說(shuō)明GAL能提高海馬神經(jīng)細(xì)胞在H2O2和Glu損傷中的存活率，并且這種作用能被其拮抗劑所阻斷。此外，海馬神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)受體GalR2和GalR3