氧化槐定堿對缺糖缺氧再灌注損傷的新生大鼠海馬神經(jīng)細胞的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：觀察氧化槐定堿（Oxysophoridine，OSR）對原代培養(yǎng)的新生大鼠海馬神經(jīng)細胞缺糖缺氧再灌注損傷的保護作用，并初步探討 OSR對原代培養(yǎng)的新生大鼠海馬神經(jīng)細胞缺糖缺氧再灌注損傷的保護作用的可能機制。
　　方法：1.以原代培養(yǎng)的新生大鼠海馬神經(jīng)細胞為研究對象，用無糖培養(yǎng)液結(jié)合物理性缺氧建立缺糖缺氧再灌注損傷模型。
　　2.MTT法測定神經(jīng)細胞存活率、化學比色法測定神經(jīng)細胞乳酸脫氫酶（ LDH）漏出率以及激光共聚焦

2、技術(shù)測定神經(jīng)細胞內(nèi)線粒體膜電位（Mitochondrial membrane potential，MMP）水平的變化。
　　3.化學比色法測定神經(jīng)細胞培養(yǎng)液中谷氨酸（Glu）的含量。Western blot方法和實時熒光定量PCR技術(shù)檢測大鼠海馬神經(jīng)細胞NMDA受體NR1亞基蛋白和mRNA的表達。激光共聚焦技術(shù)測定神經(jīng)細胞內(nèi)游離鈣離子濃度（[Ca2+]i）的變化?；瘜W比色法測定神經(jīng)細胞內(nèi)丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、

3、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）、一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）水平的變化。
　　結(jié)果：1.與正常組相比，缺糖缺氧再灌注損傷模型組可顯著降低神經(jīng)細胞的存活率（P＜0.01），提高乳酸脫氫酶的漏出率（P＜0.01），降低神經(jīng)細胞內(nèi)線粒體膜電位的熒光比值（P＜0.01）。
　　2.與模型組相比，氧化槐定堿治療組（20、5、1.25mg/L）可顯著提高大鼠海馬神經(jīng)細胞的存活率（P＜0.01），降低

4、乳酸脫氫酶的漏出率（P＜0.05，0.01）。氧化槐定堿治療組（20、5mg/L）與模型組相比，可明顯提高神經(jīng)細胞內(nèi)線粒體膜電位的熒光比值（P＜0.05，0.01）。
　　3.與模型組相比，氧化槐定堿治療組（20、5、1.25mg/L）可以減少神經(jīng)細胞培養(yǎng)液中谷氨酸的含量（P＜0.05，0.01）。氧化槐定堿治療組（20mg/L）與模型組相比，可明顯抑制NMDA受體NR1亞基蛋白和mRNA的表達（P＜0.05，0.01）。

5、　　4.與模型組相比，氧化槐定堿治療組（20、5、1.25mg/L）可減少神經(jīng)細胞內(nèi)游離Ca2+濃度（P＜0.05，0.01）。
　　5.氧化槐定堿治療組（20、5、1.25mg/L）與模型組相比，可明顯降低神經(jīng)細胞內(nèi)MDA的含量，提高神經(jīng)細胞內(nèi)SOD的活性（P＜0.05，0.01）。與模型組相比，氧化槐定堿治療組（20、5mg/L）可明顯提高神經(jīng)細胞內(nèi)GSH-Px和CAT的活性（P＜0.01）。氧化槐定堿治療組（20、5mg/L

6、）與模型組相比，可顯著降低神經(jīng)細胞內(nèi)NO含量（P＜0.05，0.01）。與模型組相比，氧化槐定堿治療組（20、5、1.25mg/L）可顯著降低神經(jīng)細胞內(nèi)NOS的活性（P＜0.05，0.01）。
　　結(jié)論：1.氧化槐定堿對缺糖缺氧再灌注損傷的大鼠海馬神經(jīng)細胞具有保護作用。
　　2.氧化槐定堿對缺糖缺氧再灌注損傷的大鼠海馬神經(jīng)細胞的保護作用機制可能與抑制興奮性氨基酸毒性，從而減輕興奮性氨基酸毒性所致的細胞內(nèi)鈣超載和氧化應激損傷有