超極化激活電流對新生大鼠海馬缺氧缺血性神經(jīng)損傷的保護作用研究.pdf

1、目的：
　　運用免疫組化和全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)觀察超極化激活的環(huán)核苷酸門控（HCN）通道在海馬CA1區(qū)的分布，研究缺氧缺血前后Ih的變化以及HCN通道阻斷劑對缺氧缺血后神經(jīng)元的作用，為治療新生兒缺氧缺血性腦?。℉IE）尋找新靶點提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.免疫組化染色
　　選取新生SD大鼠，對海馬HCN通道1-4亞型進(jìn)行免疫組化染色，激光共聚焦顯微鏡下觀察HCN通道在海馬CA1區(qū)及椎體神經(jīng)元上的分布情況。

2、r>　　對急性分離的腦片進(jìn)行To-pro-3染色以標(biāo)記死亡的神經(jīng)元數(shù)目，觀察缺氧缺血（HI）前后及應(yīng)用HCN通道阻斷劑CsCl前后海馬CA1區(qū)椎體神經(jīng)元死亡數(shù)目的變化情況。
　　2.電生理記錄
　　利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，記錄新生SD大鼠急性分離腦片海馬CA1區(qū)椎體神經(jīng)元的Ih，并觀察HI前后Ih及其激活動力學(xué)、自發(fā)放電等電生理特性的變化。
　　結(jié)果：
　　1.免疫組化染色結(jié)果顯示HCN1-4通道在海馬CA1區(qū)均存

3、在熒光染色。
　　2.海馬CA1區(qū)椎體神經(jīng)元可記錄到呈電壓依賴相關(guān)的超極化快速激活、緩慢去活的內(nèi)向電流Ih。
　　3.HI使椎體神經(jīng)元Ih振幅增大，自發(fā)放電的頻率減少，而HCN通道阻斷劑使自發(fā)放電頻率增加。
　　4.海馬椎體神經(jīng)元隨著HI時間的延長逐漸死亡，HCN通道阻斷劑顯著增加了死亡神經(jīng)元的數(shù)量。
　　結(jié)論：
　　新生大鼠海馬CA1區(qū)表達(dá)HCN通道，HI增大椎體神經(jīng)元的Ih，減少自發(fā)放電的頻率，而HCN