腺苷A2AR拮抗劑SCH58261對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的神經(jīng)保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：
　　建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷（hypoxic ischemic brain damage, HIBD）模型，研究選擇性A2AR拮抗劑SCH58261對短期神經(jīng)行為學(xué)、ICAM-1的表達(dá)及細(xì)胞凋亡（細(xì)胞凋亡指數(shù)）的影響，探討其對新生大鼠HIBD是否存在神經(jīng)保護(hù)作用及合適藥物劑量。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)分組及模型制作：將40只7日齡新生SD大鼠隨機(jī)分為5組：Sham組、HIBD組、SCH582610.01

2、mg/kg組、SCH582610.2 mg/kg組、SCH582612 mg/kg組，每組各8只。參照Rice法建立HIBD模型，Sham組僅分離左頸總動脈，不進(jìn)行缺氧缺血；HIBD組結(jié)扎左頸總動脈，置于8％氧氣中缺氧2小時(shí)（h）；不同劑量給藥組于HIBD造模后即刻腹腔注射SCH582610.01 mg/kg、0.2 mg/kg、2 mg/kg(均溶于0.1 ml DMSO中)，HIBD組給以0.1 ml的DMSO。
　　2.觀察

3、指標(biāo)：各組新生大鼠于HIBD后24h進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評定，然后斷頭處死分別進(jìn)行HE染色觀察腦組織病理改變、免疫組織化學(xué)法檢測ICAM-1表達(dá)、TUNEL法觀察細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果：
　　1.短期神經(jīng)行為學(xué)評定：與Sham組比較，其余4組完成三項(xiàng)神經(jīng)反射成績均較差，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示缺氧缺血后短期神經(jīng)功能受損。與HIBD組相比，三個(gè)SCH58261給藥組翻正反射、懸崖逃避反射及趨地反射所需時(shí)間均縮短（P<0.

4、05）；隨著劑量的減低，三項(xiàng)短期感覺運(yùn)動反射所需時(shí)間減少（P<0.05），其中0.01 mg/kg組作用最明顯。
　　2.腦組織病理形態(tài)學(xué)改變：Sham組細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，形態(tài)正常，邊界清楚，核仁清晰。HIBD組腦組織結(jié)構(gòu)紊亂，細(xì)胞數(shù)明顯減少，細(xì)胞腫脹、變性，神經(jīng)元壞死明顯。SCH582612mg/kg組可見較多核深染、固縮，與HIBD組相比差異不大；0.2 mg/kg組排列紊亂，可見部分形態(tài)正常的細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)多于2 mg/kg組；0

5、.01 mg/kg組神經(jīng)細(xì)胞存活數(shù)增多，細(xì)胞排列尚規(guī)則，僅見少許細(xì)胞核固縮、碎裂，較0.2 mg/kg組及2 mg/kg組腦組織損傷減輕。
　　3.免疫組化觀察ICAM-1的表達(dá)：ICAM-1陽性染色呈棕黃色細(xì)顆粒沉積，陽性著色于神經(jīng)元胞漿和胞核內(nèi)均可見。ICAM-1在Sham組低水平表達(dá)，其余4組腦組織中ICAM-1的表達(dá)均較Sham組增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與HIBD組相比，三個(gè)SCH58261給藥組ICAM

6、-1的表達(dá)均降低（P<0.05）；隨著劑量的減低，ICAM-1的表達(dá)逐漸下降（P<0.05），其中0.01 mg/kg組表達(dá)最低。
　　4.TUNEL技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡：Sham組僅見極少量的TUNEL陽性細(xì)胞，其他4組凋亡細(xì)胞相對增加，AI較Sham組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與HIBD組相比，三個(gè)SCH58261給藥組AI降低（P<0.05）；隨著劑量的減低， AI逐漸減少（P<0.05），其中0.01 mg/kg

7、組AI最少。
　　5.AI與ICAM-1表達(dá)之間的相關(guān)性分析：所有模型組（包括HIBD組及三個(gè)給藥組）腦組織中AI與ICAM-1均呈顯著正相關(guān)（r1=0.825，P1<0.05；r2=0.937， P2<0.01；r3=0.868，P3<0.01；r4=0.830，P4<0.05），提示隨著ICAM-1表達(dá)的增加，細(xì)胞凋亡增加。
　　6.短期神經(jīng)行為學(xué)評價(jià)與 ICAM-1表達(dá)的相關(guān)性分析：所有模型組（包括HIBD組及三個(gè)給藥

8、組）翻正反射、懸崖逃避反射、趨地反射與ICAM-1的表達(dá)分別呈正相關(guān)（r1=0.888，P1<0.01；r2=0.734，P2<0.05；r3=0.863，P3<0.01；r4=0.902， P4<0.01）、（r1=0.766，P1<0.05；r2=0.897，P2<0.01；r3=0.831，P3<0.05；r4=0.769， P4<0.05）、（r1=0.878，P1<0.01；r2=0.817，P2<0.05；r3=0.762，

9、P3<0.05；r4=0.804， P4<0.05），這均提示隨著ICAM-1表達(dá)的增加，短期感覺運(yùn)動反射完成時(shí)間增加。
　　結(jié)論：
　　1.缺氧缺血后新生大鼠出現(xiàn)明顯的腦損傷，表現(xiàn)在：腦組織結(jié)構(gòu)紊亂，細(xì)胞形態(tài)改變?nèi)缂?xì)胞腫脹、變性、壞死，短期神經(jīng)功能受損，證實(shí)新生大鼠HIBD模型建立成功。
　　2.缺氧缺血后新生大鼠腦組織中ICAM-1表達(dá)明顯增加，且ICAM-1表達(dá)與AI、短期感覺運(yùn)動反射均呈正相關(guān)，說明ICAM-1