別嘌呤醇對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的保護作用研究.pdf

1、目的: 本實驗通過制備新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)模型，腹腔注射外源性別嘌呤醇(ALLO)，觀察ALL0對新生HIBD大鼠腦組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羥自由基(·OH)及caspase-3基因表達的影響，以探討ALLO保護腦組織的機制，以期為臨床治療新生兒HIBD提供有效的方法和途徑。 方法: 1.制備HIBD模型：將新生7日齡Wistar大鼠行頸部正中切口，分離結(jié)扎左側(cè)頸總動脈后給

2、予低氧(8％O2，92％N2)處理2小時，制成HIBD模型。觀察缺氧時動物行為變化。 2.行為能力檢查：分別于手術(shù)前及缺氧后1小時對每只新生大鼠進行翻身能力、夾尾左旋測試。 3.腦大體形態(tài)檢查：分別于處死時觀察每只新生大鼠腦組織的大體形態(tài)。 4.SOD、MDA、·OH及caspase-3基因表達測定：56只新生7日齡Wistar大鼠隨機分為假手術(shù)組(sham)、生理鹽水對照組(NS)和ALLO干預組(ALLO)。

3、假手術(shù)組(8只)只予分離但不結(jié)扎左側(cè)頸總動脈，于手術(shù)恢復后24h處死。其余兩組于缺氧結(jié)束后lh和24h兩次腹腔注射生理鹽水或ALLO，并于末次給藥后0.5h、24h以及72h處死(每組8只動物)，以患側(cè)腦組織為標本，應用黃嘌呤氧化酶法測定SOD，應用改良的硫代巴比妥酸法測定MDA，應用Fenton反應測定·OH，應用逆轉(zhuǎn)錄酶一聚合酶鏈式反應(RT-PCR)測定caspase-3基因的表達。 結(jié)果: 1.行為能力檢查術(shù)前每

4、只大鼠均做翻身能力、夾尾左旋測定，56只全部正常。sham組測定結(jié)果同前。經(jīng)歷缺氧缺血的48只大鼠，26只不能翻身，38只出現(xiàn)夾尾左旋，16只表現(xiàn)不能翻身和夾尾左旋同時存在。 2.腦大體檢查新生大鼠HIBD后NS對照組結(jié)扎側(cè)半球腦組織受損嚴重，在24h時蒼白、水腫明顯，體積明顯大于對側(cè)，72h可看到結(jié)扎側(cè)半球局部出現(xiàn)液化壞死灶；ALLO干預組大鼠未見上述改變或僅見結(jié)扎側(cè)腦半球輕微的水腫；sham組大鼠大腦半球左右對稱，未見任何病

5、理變化。 3.SOD、MDA、·OH表達檢測結(jié)果與sham組比較，MDA、·OH在HIBD后24h、72hNS對照組的表達明顯增高(P<0.05)，而ALLO干預組水平則較同時間點的NS對照組低(P<0.05)?？係OD活力在HIBD后24h、72hNS對照組明顯降低，與sham組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而ALLO干預組水平則較同時間點的NS對照組有所回升(P

6、sham組兩兩比較均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 4.caspase-3基因表達檢測結(jié)果與sham組比較，caspase-3基因在HIBD后24h、72hNS對照組表達明顯增高(P<0.05)，而ALLO干預組水平則較同時間點的NS對照組低(P<0.05)。HIBD后24h、72hNS對照組與假手術(shù)組、與同時間點ALLO干預組比較均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而HIBD后0.5hNS對照組與ALLO干預組及sham組兩兩比較