高壓氧對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：利用新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)動物模型,觀察HIBD以及高壓氧(hyperbaric oxygen,HBO)干預后新生大鼠不同時間點腦組織大體及其細胞形態(tài)變化、生長相關蛋白(growth-associated protein-43,GAP-43)及神經(jīng)生長抑制因子Nogo-A的合成情況,從而探討HBO干預對新生大鼠HIBD的保護作用及機制,為高壓氧治療新生兒缺氧

2、缺血性腦病(hypoxic ischemic encephalopathy,HIE)提供新的理論依據(jù)。 方法：7日齡Wistar大鼠144只,雌雄不限,體重12～18g,隨機分為3組：對照組(CON組),HIBD組和HBO組,各48只,后兩組制成模型后根據(jù)處死動物的時間不同隨機分為缺血缺氧后1、4、7、10、14、21d天6個亞組,每組8只,CON組不做任何處理,也在相應的時間點分為6個亞組,每組8只。模型采用阻斷右側頸總動脈后

3、置于含8％O2的低氧環(huán)境中2h制備而成。HBO組于缺血缺氧1h后行HBO處理：壓力為2.0ATA、60min/次、1次/d,1、4d亞組連續(xù)治療至動物處死,其余亞組連續(xù)治療7d。各組大鼠于相應時間點斷頭取腦后肉眼觀察右側腦組織大體,光鏡下觀察各組右側腦組織HE染色的病理改變,免疫組織化學方法檢測三組大鼠不同時間點右側大腦皮層GAP-43和Nogo-A的表達。 結果：(1)缺血缺氧后新生大鼠出現(xiàn)不同程度的行為異常。(2)缺血缺氧后

4、肉眼可見腦組織大體有不同程度的異常改變,HBO治療后上述改變減輕。(3)HE染色:CON組腦組織細胞層次清楚、形態(tài)正常,無神經(jīng)細胞缺失；HIBD組術后1d可見右側大腦皮層細胞腫脹明顯,出現(xiàn)變性、壞死；術后4d壞死明顯；術后7d神經(jīng)元數(shù)量明顯減少,膠質細胞增生、排列紊亂。術后14d、21d神經(jīng)元大量丟失,膠質細胞增生明顯。HBO組各時間點病理變化較HIBD組輕,細胞排列尚規(guī)則。(4)GAP-43的表達:GAP-43陽性染色呈棕黃色的細顆粒

5、沉積,陽性細胞廣泛表達于大腦皮層和海馬,陽性著色主要位于神經(jīng)元胞體和突起,三組GAP-43陽性產物表達高峰均在術后第10d對應的時間,同組不同時間點陽性細胞平均灰度值比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。HIBD組各時間點GAP-43免疫陽性顆粒染色較CON組深,數(shù)量多,陽性細胞平均灰度值較CON組低,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01);HBO組各時間點GAP-43免疫陽性顆粒染色較HIBD組深,數(shù)量多,陽性細胞平均灰度值較HIBD組低

6、,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);(5)Nogo-A表達:Nogo-A陽性染色呈棕黃色的細顆粒沉積,廣泛分布于大腦皮層,陽性著色主要位于少突膠質細胞,隨日齡增加染色逐漸加深,同組不同時間點陽性細胞平均灰度值比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。HIBD組各時間點Nogo-A免疫陽性顆粒最多,染色最深,各時間點陽性細胞平均灰度值均較CON組和HBO組低,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結論：1、從病理學和大體上證實HBO