通過調(diào)節(jié)MAPK信號(hào)通路探討氧化槐果堿對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元氧糖剝奪再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：觀察氧化槐果堿(Oxysophocarpine,OSC)對(duì)原代培養(yǎng)的新生大鼠海馬神經(jīng)元氧糖剝奪再灌注損傷的保護(hù)作用并探討其作用機(jī)制與MAPK信號(hào)通路的關(guān)系。
　　方法：1.原代培養(yǎng)新生大鼠海馬神經(jīng)元。
　　2.采用2-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide（MTT）法酶標(biāo)儀檢測(cè)海馬神經(jīng)元存活率，采用紫外分光光度計(jì)法檢測(cè)海馬神經(jīng)細(xì)胞乳酸脫氫酶(

2、LDH)漏出率。
　　3.以激光共聚焦顯微鏡為工具，使用Fluo-3熒光探針檢測(cè)游離的鈣離子表達(dá)數(shù)目含量以及使用JC-1探針來檢測(cè)原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元內(nèi)線粒體膜電位（Mitochondrial membrane potential，MMP）水平的變化。
　　4.通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元內(nèi)IL-1β,TNF-αmRNA的表達(dá)。
　　5.通過免疫蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)ERK1/2,p-ERK1/2,JNK1

3、/2,p-JNK1/2,p38和p-p38MAPK的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：1.與正常組比較，模型組的神經(jīng)元的存活率明顯降低，乳酸脫氫酶的漏出率顯著增加（P<0.01)；與模型組比較，氧化槐果堿劑量組（0.8,2,和5μmol/L）可顯著提高海馬神經(jīng)細(xì)胞的存活率(P<0.01)，并且可顯著降低乳酸脫氫酶的漏出率(P<0.01)。
　　2.與正常組比較，模型組海馬神經(jīng)元內(nèi)游離的鈣離子含量顯著上升，線粒體膜電位熒光比值顯著降低（P

4、<0.01）；與模型組比較，氧化槐果堿劑量組（0.8,2,和5μmol/L）可顯著降低海馬神經(jīng)元內(nèi)游離鈣離子的含量(P<0.05，P<0.01)，穩(wěn)定線粒體膜電位(P<0.01)。
　　3.與正常組比較，模型組大鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)IL-1β,TNF-αmRNA的表達(dá)明顯增高（P<0.01），與模型組相比，氧化槐果堿劑量組（5μmol/L）能夠顯著下調(diào)IL-1β,TNF-αmRNA的表達(dá)(P<0.05)。
　　4.與正常組相比，細(xì)

5、胞內(nèi)的ERK1/2,p-ERK1/2,JNK1/2,p-JNK1/2,p-p38和p-p38MAPK的蛋白水平明顯上調(diào)（P<0.01），與模型組相比氧化槐果堿劑量組（5μmol/L）能夠顯著下調(diào)p-ERK1/2,p-JNK1/2,以及p-p38MAPK的蛋白水平的表達(dá)（P<0.05），然而對(duì)于細(xì)胞內(nèi)的ERK1/2,JNK1/2,和p38的蛋白水平的表達(dá)無顯著性差異。
　　結(jié)論：1.氧化槐果堿對(duì)氧糖剝奪再灌注損傷的大鼠海馬神經(jīng)元有保