去氫木香內(nèi)酯對大鼠海馬腦片氧糖剝奪損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　研究去氫木香內(nèi)酯（dehydrocostuslactone，DHL）對離體大鼠海馬腦片氧糖剝奪損傷的保護(hù)作用，并從線粒體凋亡的角度探討其機(jī)制。
　　方法：建立大鼠海馬腦片氧糖剝奪損傷模型（oxygen glucose deprivation，OGD），將腦片隨機(jī)分為空白組、模型組、Nimodipine組(10μM)、DHL低、中、高劑量組(1、5和10μM)。空白組腦片用正常aCSF孵育，持續(xù)通入95% O2/5

2、% CO2氣體。模型組、Nimodipine組、DHL低、中、高劑量組腦片在無糖aCSF中孵育，持續(xù)通入95%N2/5%CO2氣體30 min后，轉(zhuǎn)移到95%O2/5%CO2氣體環(huán)境中復(fù)氧復(fù)糖孵育1h。1 h后收集孵育上清液，測孵育上清液LDH的含量；腦片與2%TTC，在37℃避光孵育10 min，按各樣本腦片重量加入20μl/mg的抽提液（無水乙醇:DMSO=1:1），室溫密封避光抽提24 h，測490 nm處吸光度值；收集各組腦片，

3、利用Western blot技術(shù)檢測腦片中Cyto-c，Apaf-1，Noxa，Mcl-1，Bcl-2，Bax，Caspase-9，Caspase-7和Caspase-3蛋白含量。Caspase抑制劑實(shí)驗(yàn)操作如上，腦片隨機(jī)分為空白組、模型組、Nimodipine組(10μM)、Z-VAD-FMK組和Z-VAD-FMK+DHL高劑量組。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，收集各組腦片，利用Western blot技術(shù)檢測腦片中Cyto-c，Apaf-1，Casp

4、ase-9，Caspase-7和Caspase-3蛋白含量。
　　結(jié)果：
　　1、與模型組相比，DHL低、中、高劑量組(1、5和10μM)使LDH的釋放量減少(p＜0.05)，使TTC染色的吸光度值升高(p＜0.05)；使Bax的蛋白表達(dá)明顯降低(p＜0.05)，使Bcl-2和Mcl-1的蛋白表達(dá)明顯升高；使Caspase-9，Caspase-7，Caspase-3，Cyto-c，Apaf-1和Noxa的蛋白表達(dá)明顯降低(p

5、＜0.05)。
　　2、與模型組相比，Z-VAD-FMK組和Z-VAD-FMK+DHL高劑量組使Caspase-9，Caspase-7，Caspase-3，Cyto-c和Apaf-1的蛋白表達(dá)明顯降低(p＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、去氫木香內(nèi)酯可以保護(hù)大鼠海馬腦片氧糖剝奪的損傷，其保護(hù)機(jī)制可能是通過減少細(xì)胞LDH的釋放量，提高線粒體呼吸酶的活性，以及下調(diào)Bax，Caspase-9，Caspase-7，Caspa