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文檔簡介
1、目的:應(yīng)用離體大鼠海馬腦片電生理記錄技術(shù),觀察異氟烷預(yù)處理在缺氧過程中和復(fù)氧后對海馬腦片突觸后誘發(fā)群峰電位變化以及PKCγ表達(dá)的影響,探討異氟烷預(yù)處理對腦組織缺氧損傷的保護(hù)作用以及與PKCγ亞型的關(guān)系。 方法:大鼠乙醚麻醉后迅速斷頭取腦,低溫分離海馬,并沿矢狀面將其切成0.4mm厚的腦片,放入人工腦脊液中孵育備用,人工腦脊液中持續(xù)通入混合氣體95%O2和5%CO2。實驗分為缺氧對照組(CON)、Bisindolylmaleimi
2、de Ⅰ(PKCγ抑制劑)組(BIS)、異氟烷預(yù)處理組(ISO)和異氟烷加Bisindolylmaleimide Ⅰ組(IS0+BIS)。平衡灌注后,雙脈沖方波刺激海馬CA3區(qū)Schaffer側(cè)支,記錄海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞誘發(fā)的群峰電位(population spike,PS),其幅度作為基礎(chǔ)值,所有取得基礎(chǔ)值的腦片分別按上述分組進(jìn)行實驗。用95%N2和5%CO2混合氣通入無糖人工腦脊液灌注腦片,實施缺氧無糖(ODG),時間為14 mi
3、n。更換正常人工腦脊液并通入95%O2和5%CO2混合氣,實施復(fù)氧,時間60min。2%異氟烷在缺氧前45 min給予,給藥時間為30 min,沖洗15min。Bisindolylmaleimide Ⅰ(0.02μmol·L-1)在缺氧前75 min給予,給藥時間為30 min。實驗結(jié)束后各組取腦片4—5片用TTC染色,酶標(biāo)儀測定OD490值,與空白對照值比較,分析腦片活性。其余腦片用于免疫組織化學(xué)或免疫印跡方法分析PKCγ表達(dá)的變化。
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