缺氧對(duì)大鼠器官型海馬腦片tau蛋白的影響.pdf

1、目的:1.建立4周齡大鼠海馬腦片培養(yǎng)模型。2.觀察缺氧對(duì)4周齡大鼠海馬腦片tau蛋白的影響，以期建立擬癡呆組織模型。 方法:1.體外微孔膜插件培養(yǎng)海馬腦片，應(yīng)用倒置相差顯微鏡、LDH檢測(cè)試劑盒、免疫熒光組織化學(xué)法及共聚焦激光掃描顯微鏡觀察培養(yǎng)情況。2.標(biāo)準(zhǔn)條件培養(yǎng)7天后，入缺氧培養(yǎng)箱分別缺氧30min，1h，1.5h，2h，然后恢復(fù)標(biāo)準(zhǔn)條件培養(yǎng)6天，應(yīng)用倒置相差顯微鏡觀察培養(yǎng)情況，用免疫熒光組織化學(xué)法及共聚焦激光掃描顯微鏡對(duì)ta

2、u蛋白表達(dá)水平進(jìn)行觀察和統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果:1.培養(yǎng)海馬腦片逐漸變薄，細(xì)胞條帶亮度逐漸減弱；培養(yǎng)12d內(nèi)，培養(yǎng)液中LDH含量穩(wěn)定，海馬腦片存活良好；在培養(yǎng)過程中，神經(jīng)細(xì)胞逐漸減少，星形膠質(zhì)細(xì)胞逐漸增多。2.p-Tau(Ser214)蛋白與總蛋白Tau-5的熒光強(qiáng)度比值顯示缺氧1h組在培養(yǎng)第13天(即缺氧第6天)比對(duì)照組明顯增大(P<0.05)，Tau(Ab-214)蛋白與總蛋白Tau-5的熒光強(qiáng)度比值顯示缺氧組在培養(yǎng)第13天與對(duì)照

3、組無顯著差異(P>0.05)。3.p-Tau(Ser396)蛋白，缺氧30min組的表達(dá)量穩(wěn)定增加，缺氧1h組的表達(dá)量在培養(yǎng)第10天(即缺氧第3天)比對(duì)照組明顯增多(P<0.05)，在培養(yǎng)第13天表達(dá)量顯著減少(P<0.05)。4.p-Tau(Thr231)蛋白在培養(yǎng)第10天，缺氧1h組的表達(dá)量比對(duì)照組明顯增多(P<0.05)，在培養(yǎng)第13天缺氧30min、1h組的表達(dá)量均明顯增多(P<0.05)。Tau(Ab-231)蛋白在培養(yǎng)第10

4、天，缺氧1h組的表達(dá)量比對(duì)照組明顯增多(P<0.05)，在培養(yǎng)第13天缺氧30min組的表達(dá)量明顯增多(P<0.05)。5.p-Tau(Thr205)蛋白，在培養(yǎng)第10、13天，缺氧30min、1h組的表達(dá)量比對(duì)照組均明顯增多(P<0.05)。6.p-Tau(Thr181)蛋白在培養(yǎng)第13天缺氧30min組的表達(dá)量比對(duì)照組明顯增多(P<0.05)。 結(jié)論:1.建立的4周齡大鼠器官型海馬腦片培養(yǎng)模型可為體外研究神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病提供