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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:建立大鼠正常器官型培養(yǎng)腦片模型,并對(duì)器官型腦片中的大錐體細(xì)胞進(jìn)行鑒定。器官型腦片培養(yǎng)成功后,可在此基礎(chǔ)上建立各種疾病的器官型腦片模型,探討疾病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制及規(guī)律。
方法:本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用millicell-CM insert微孔膜插入式培養(yǎng)技術(shù)以及由最小培養(yǎng)基MEM,馬血清,Hanks’液組成的培養(yǎng)液成功培養(yǎng)了大鼠器官型腦片,并用抗非磷酸化神經(jīng)微絲單克隆抗體(SMI-32單克隆抗體)進(jìn)行免疫組化染色,對(duì)器官型腦片和在體腦
2、組織的大錐體細(xì)胞進(jìn)行鑒定,根據(jù)在體腦皮層的大錐體細(xì)胞對(duì)器官型腦片的大錐體細(xì)胞進(jìn)行定位及形態(tài)比較,在200×鏡下測(cè)定3個(gè)隨機(jī)視野中5mm×5mm目鏡測(cè)微尺面積下的SMI-32陽(yáng)性大錐體細(xì)胞的數(shù)目,對(duì)培養(yǎng)兩周、三周、四周的腦片之間大錐體細(xì)胞計(jì)數(shù)并比較。
結(jié)果
1 大鼠器官型培養(yǎng)腦片存活率達(dá)80%以上,可存活一個(gè)月以上。
2 在體大腦皮層內(nèi),第Ⅴ層細(xì)胞為大錐體細(xì)胞層,細(xì)胞胞體呈現(xiàn)多角形或者橢圓形,胞漿
3、著色淺,有的呈空泡狀,樹突或不明顯,軸突較長(zhǎng),伸向皮層。
3 培養(yǎng)腦片中,按照在體皮層大椎體細(xì)胞所分布的位置,可見在大腦皮層深部,第Ⅴ層細(xì)胞呈錐體形或者多角形,胞體直徑25~50μm,每個(gè)細(xì)胞的胞體顏色均一,胞漿著色深,樹突明顯,都有一個(gè)長(zhǎng)的軸突伸向皮層,軸突較長(zhǎng)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞的橫向突起增長(zhǎng)變多。
4培養(yǎng)2、3、4周的腦片中的大錐體細(xì)胞計(jì)數(shù)分別為28.50±4.34、27.83±4.40、27.6
4、7±3.55,各時(shí)點(diǎn)皮層錐體細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)顯著差異(P>0.05)。
結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用millicell-CM insert微孔膜插入式培養(yǎng)技術(shù)以及由最小培養(yǎng)基MEM,馬血清,Hanks’液組成的培養(yǎng)液成功培養(yǎng)了大鼠器官型腦片,摸索并明確了其生長(zhǎng)過(guò)程中對(duì)溫度、培養(yǎng)液酸堿度、糖含量及氧氣濃度的要求,最佳培養(yǎng)環(huán)境條件為:37℃,培養(yǎng)液PH值為7.2-7.4,糖含量27.76g/L,氣體配比為5%CO2+95%空氣,濕度為99%。培
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