槲皮素對SD大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞糖氧剝奪-復(fù)供損傷的保護(hù)機制研究.pdf

1、目的：探討槲皮素對SD大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞糖氧剝奪/復(fù)供損傷保護(hù)作用機制研究。
　　方法：對SD大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)及分離鑒定，用連二亞硫酸鈉的無糖的 Earles’溶液建立SD大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞糖氧剝奪/復(fù)供損傷模型，通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)；用CCK-8法與LDH漏出量法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞的存活率；采用PI/Hoechst33342染色法觀察細(xì)胞的凋亡形態(tài)和特征研究不同濃度的槲皮素和陽性對照尼莫地平對星形膠質(zhì)細(xì)胞糖氧剝奪/復(fù)供

2、損傷的保護(hù)作用。用蛋白印跡法檢測不同濃度的槲皮素和陽性對照尼莫地平預(yù)處理的星形膠質(zhì)細(xì)胞糖氧剝奪/復(fù)供后GLT-1蛋白表達(dá)的變化；用Rh123染色法來測定細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位的變化；通過SOD、GSH、MDA、ROS檢測試劑盒檢測不同濃度的槲皮素和陽性對照尼莫地平預(yù)處理的星形膠質(zhì)細(xì)胞糖氧剝奪/復(fù)供損傷后SOD、GSH、MDA、ROS的變化，用蛋白印跡法檢測不同濃度的槲皮素和陽性對照尼莫地平預(yù)處理的星形膠質(zhì)細(xì)胞糖氧剝奪/復(fù)供損傷后凋亡蛋白Ba

3、x、Bcl-2、Caspase-3蛋白表達(dá)的變化，從而進(jìn)一步研究槲皮素保護(hù)星形膠質(zhì)細(xì)胞糖氧剝奪/復(fù)供損傷機制的研究。
　　結(jié)果：⑴成功培養(yǎng)并分離了SD大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞，成功篩選了糖氧剝奪/復(fù)供損傷模型的條件。⑵槲皮素預(yù)處理后糖氧剝奪/復(fù)供的 SD大鼠腦星形膠質(zhì)細(xì)胞存活率顯著提高、LDH漏出量明顯降低；槲皮素預(yù)處理后可以明顯改善損傷的星形膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡形態(tài)，降低損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡率。⑶槲皮素預(yù)處理后的糖氧剝奪/復(fù)供損傷的星形膠

4、質(zhì)細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運體（GLT-1）蛋白表達(dá)顯著升高；細(xì)胞線粒體膜電位下降比例降低；SOD、GSH活力增高、ROS、MDA含量下降，顯示出明顯的抗氧化作用；抑凋亡蛋白 Bcl-2表達(dá)均增多，促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表達(dá)均顯著降低。
　　結(jié)論：槲皮素對糖氧剝奪/復(fù)供損傷SD大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞有保護(hù)作用，其作用機制可能與提高星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)谷氨酸轉(zhuǎn)運體蛋白的表達(dá)，降低線粒體膜損傷，減輕氧自由基聚集程度，以及抑制細(xì)胞凋亡等因素有關(guān)。