槲皮素對SD大鼠星形膠質(zhì)細胞糖氧剝奪-復供損傷的保護機制研究.pdf

1、目的：探討槲皮素對SD大鼠星形膠質(zhì)細胞糖氧剝奪/復供損傷保護作用機制研究。
　　方法：對SD大鼠星形膠質(zhì)細胞的原代培養(yǎng)及分離鑒定，用連二亞硫酸鈉的無糖的 Earles’溶液建立SD大鼠星形膠質(zhì)細胞糖氧剝奪/復供損傷模型，通過倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)；用CCK-8法與LDH漏出量法檢測星形膠質(zhì)細胞的存活率；采用PI/Hoechst33342染色法觀察細胞的凋亡形態(tài)和特征研究不同濃度的槲皮素和陽性對照尼莫地平對星形膠質(zhì)細胞糖氧剝奪/復供

2、損傷的保護作用。用蛋白印跡法檢測不同濃度的槲皮素和陽性對照尼莫地平預處理的星形膠質(zhì)細胞糖氧剝奪/復供后GLT-1蛋白表達的變化；用Rh123染色法來測定細胞內(nèi)線粒體膜電位的變化；通過SOD、GSH、MDA、ROS檢測試劑盒檢測不同濃度的槲皮素和陽性對照尼莫地平預處理的星形膠質(zhì)細胞糖氧剝奪/復供損傷后SOD、GSH、MDA、ROS的變化，用蛋白印跡法檢測不同濃度的槲皮素和陽性對照尼莫地平預處理的星形膠質(zhì)細胞糖氧剝奪/復供損傷后凋亡蛋白Ba

3、x、Bcl-2、Caspase-3蛋白表達的變化，從而進一步研究槲皮素保護星形膠質(zhì)細胞糖氧剝奪/復供損傷機制的研究。
　　結(jié)果：⑴成功培養(yǎng)并分離了SD大鼠星形膠質(zhì)細胞，成功篩選了糖氧剝奪/復供損傷模型的條件。⑵槲皮素預處理后糖氧剝奪/復供的 SD大鼠腦星形膠質(zhì)細胞存活率顯著提高、LDH漏出量明顯降低；槲皮素預處理后可以明顯改善損傷的星形膠質(zhì)細胞的凋亡形態(tài)，降低損傷后星形膠質(zhì)細胞的凋亡率。⑶槲皮素預處理后的糖氧剝奪/復供損傷的星形膠

4、質(zhì)細胞谷氨酸轉(zhuǎn)運體（GLT-1）蛋白表達顯著升高；細胞線粒體膜電位下降比例降低；SOD、GSH活力增高、ROS、MDA含量下降，顯示出明顯的抗氧化作用；抑凋亡蛋白 Bcl-2表達均增多，促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表達均顯著降低。
　　結(jié)論：槲皮素對糖氧剝奪/復供損傷SD大鼠星形膠質(zhì)細胞有保護作用，其作用機制可能與提高星形膠質(zhì)細胞內(nèi)谷氨酸轉(zhuǎn)運體蛋白的表達，降低線粒體膜損傷，減輕氧自由基聚集程度，以及抑制細胞凋亡等因素有關(guān)。