木香藥材中去氫木香內(nèi)酯等活性成分提取分離及其衍生研究.pdf

1、木香作為傳統(tǒng)中藥，具有健胃消脹、調(diào)氣解郁、止痛安胎等作用?，F(xiàn)代研究表明其含有一些倍半萜類成分，其主要活性成分是去氫木香內(nèi)酯與木香烯內(nèi)酯，其具有抗腫瘤、抗菌、抗?jié)兊茸饔?。針對木香藥材活性成分的特點(diǎn)，本文對木香有效成分的提取分離和純化開展了較為系統(tǒng)的研究，對純化產(chǎn)物去氫木香內(nèi)酯進(jìn)行了衍生化研究及其衍生物抗腫瘤活性探索。相關(guān)研究為快速經(jīng)濟(jì)提取分離得到木香中去氫木香內(nèi)酯和木香烯內(nèi)酯等活性成分可提供有效的工藝指導(dǎo)，并對木香藥材中藥用組分進(jìn)行進(jìn)一

2、步挖掘和新藥研發(fā)提供研究基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支撐。
　　本文主要研究及工作結(jié)果如下：
　　對木香的提取方式，化學(xué)成分，藥理活性，衍生方式等進(jìn)行了系統(tǒng)的文獻(xiàn)綜述和評價(jià)，在此基礎(chǔ)上提出并形成了本文的總體研究和技術(shù)實(shí)施方案。
　　以去氫木香內(nèi)酯和木香烯內(nèi)酯為指標(biāo)成分，對比了溶劑提取法、水蒸氣蒸餾法、微波輔助提取法等方法對木香進(jìn)行提取分離的效率，還對比了溶劑萃取和大孔樹脂吸附法分離低極性化合物的能力。研究表明：采用微波輔助提取法，在

3、微波400W功率，1：15的料液比條件下提取10min，每份提取3次，100g木香中提取得到去氫木香內(nèi)酯和木香烯內(nèi)酯量可達(dá)3.5g；采用AB-8型大孔樹脂分離木香甲醇提取液時(shí)，95％乙醇洗脫產(chǎn)物中去氫木香內(nèi)酯和木香烯內(nèi)酯的純度分別能達(dá)到43.1%和46.8%。
　　采用硅膠柱層析法、薄層層析法(TLC)和重結(jié)晶等技術(shù)，對木香的石油醚萃取層進(jìn)行有效的分離純化，得到11個(gè)單體化合物；通過TLC、紅外、核磁等技術(shù)鑒定出7種單體成分，其分

4、別為土木香內(nèi)酯、異土木香內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、木香烯內(nèi)酯、豆甾醇、12-methoxydihydrocostunolid和孕甾烯醇酮。
　　采用高速逆流色譜（HSCCC）技術(shù)對木香的石油醚萃取層進(jìn)行高效分離和純化。通過 HPLC測試去氫木香內(nèi)酯和木香烯內(nèi)酯在不同溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)，結(jié)合分析型HSCCC分離效果，有效地指導(dǎo)HSCCC分離純化過程的溶劑選擇；通過正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，選擇合理的轉(zhuǎn)數(shù)、流速和溶劑系統(tǒng)，提出HSCCC分離時(shí)的最佳條

5、件。實(shí)驗(yàn)研究表明HSCCC分離制備去氫木香內(nèi)酯和木香烯內(nèi)酯的最佳條件為：石油醚-甲醇-水（5:7:3）溶劑系統(tǒng)，轉(zhuǎn)數(shù)為1000rpm，流速為3mL/min。該條件下總分離時(shí)間可以控制在150min內(nèi)，去氫木香內(nèi)酯和木香烯內(nèi)酯的制備量一次都能達(dá)到140m g以上，為大量制備提供了較為快速有效的方法。提出測定溶劑系統(tǒng)分配系數(shù)時(shí)，不能片面采用 HPLC測試值，其并不能夠真實(shí)反映溶劑系統(tǒng)在制備型HSCCC中的真實(shí)分配情況，而只能顯示出一定的趨勢

6、，而分析型HSCCC則比較真實(shí)的反映出溶劑系統(tǒng)的真實(shí)分配情況。另外，通過HSCCC對石油醚萃取層的分離，得到了一個(gè)新化合物10-methoxy-artemisinic acid。
　　針對去氫木香內(nèi)酯具有一定的抗腫瘤活性而卻有生物利用度低、活性不強(qiáng)等缺點(diǎn)，以提高其生物利用度和抗腫瘤活性為目標(biāo)，對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾和衍生。針對去氫木香內(nèi)酯的α-亞甲基-γ-內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，根據(jù)邁克爾加成（Michael addition reaction）原理

7、，在其 C-13位加成不同基團(tuán)結(jié)構(gòu)，獲得系列衍生化合物。實(shí)驗(yàn)完成了哌啶、嗎啉等7種衍生修飾反應(yīng)，采用硅膠柱層析等技術(shù)分離得到單體衍生物，利用紅外、核磁等鑒定技術(shù)對其衍生物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定。采用MTT法對去氫木香內(nèi)酯的衍生物及去氫木香內(nèi)酯和木香烯內(nèi)酯進(jìn)行初步抗腫瘤活性測試，結(jié)果顯示：4-羥基哌啶衍生物、嗎啉衍生物、吡咯烷衍生物、甲醇衍生物和二乙醇胺衍生物具有較明顯的抗腫瘤活性，且活性較去氫木香內(nèi)酯有所提升，可作為一種候選藥物繼續(xù)進(jìn)行深入研究