高速逆流色譜分離純化蔓荊子等藥材活性成分的研究.pdf

1、傳統(tǒng)中醫(yī)藥是世界醫(yī)學(xué)的一個(gè)重要組成部分，隨著現(xiàn)代中藥學(xué)的發(fā)展和新藥開(kāi)發(fā)的要求，人類(lèi)迫切需要了解中藥的有效成分。中國(guó)加入WTO后，中醫(yī)藥現(xiàn)代化顯示出更加廣闊的發(fā)展前景，對(duì)傳統(tǒng)藥、民族藥、中草藥、植物藥等天然藥物的分離技術(shù)也提出了更高的要求。因而開(kāi)展中藥有效成分分離新方法研究對(duì)于促進(jìn)現(xiàn)代中藥學(xué)和中藥現(xiàn)代化的發(fā)展具有重要意義。 高速逆流色譜(High-Speed Counter-Current Chromatography，簡(jiǎn)稱(chēng)HSC

2、CC)是20世紀(jì)80年代初，由Yoichiro Ito博士在液一液分配色譜的基礎(chǔ)上研究和發(fā)展起來(lái)的一種現(xiàn)代色譜分離制備技術(shù)<'[1]>。它利用兩相溶劑體系在高速旋轉(zhuǎn)的螺旋管內(nèi)建立起一種特殊的單向性流體動(dòng)力學(xué)平衡，當(dāng)其中一相作為固定相，另一相作為流動(dòng)相，在連續(xù)洗脫的過(guò)程中能保留大量的固定相，物質(zhì)的分離依據(jù)其在兩相中分配系數(shù)的不同而實(shí)現(xiàn)。由于不需要固體支撐體，因而避免了因不可逆吸附而引起的樣品損失、失活、變性等，不僅使樣品能夠全部回收，回收

3、的樣品也能反映其本來(lái)的特性，特別適合于天然生物活性成分的分離。目前，HSCCC技術(shù)已發(fā)展成為一種備受關(guān)注的新型分離純化技術(shù)，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥、天然產(chǎn)物、食品、化妝品等領(lǐng)域。 本文對(duì)HSCCC在中草藥有效成分的制備性分離純化方面的應(yīng)用進(jìn)行了研究，建立了分離純化中藥蔓荊子、升麻、丹參和魚(yú)腥草中的有效成分的新方法，并利用紫外光譜(UV)、高效液相色譜(HPLC)、核磁共振波譜(NMR)等對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物的純度和化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析和鑒定。本

4、工作可以為蔓荊子等四種中藥及其制劑的鑒別及質(zhì)量控制、藥理研究與開(kāi)發(fā)提供參考。 一、HSCCC分離純化蔓荊子主要化學(xué)成分的研究建立了HSCCC分離純化蔓荊子中主要化學(xué)成分的新方法。溶劑體系為石油醚．乙酸乙酯．甲醇．水，固定相為(5：5：3：7，v/v)體系的上相，以(5：5：3：7，v/v)和(5：5：5：5，v/v)體系的下相為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。從200 mg蔓荊子粗提物中一步分離純化得到15 mg對(duì)羥基苯甲酸、7.8 mg

5、3，6，7-三甲基槲皮萬(wàn)壽菊素、16 mg紫花牡荊素和6 mg艾黃素。經(jīng)HPLC分析，純度分別為99.7％，97.9％，99.9％和94.8％。由Uv光譜、<'1>H-NMR和<'13>C-NMR數(shù)據(jù)確定了其化學(xué)結(jié)構(gòu)。 二、HSCCC分離純化升麻主要化學(xué)成分的研究采用大孔吸附樹(shù)脂對(duì)升麻藥材進(jìn)行預(yù)處理，初步除去樣品中的大量雜質(zhì)之后，應(yīng)用HSCCC從中藥升麻中分離純化得到四個(gè)化合物。溶劑體系為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(4：6：3：

6、7，v/v)，下相為流動(dòng)相。從100 mg升麻粗提物中一步分離純化得到15.6 mg升麻素、12.8 mg咖啡酸、32.2 mg異阿魏酸和10.6 mg阿魏酸。經(jīng)HPLC分析，純度分別為99.1％，98.6％，99.9％和96.2％。由UV光譜、<'1>H-NMR和<'13>C-NMR數(shù)據(jù)來(lái)確定了其化學(xué)結(jié)構(gòu)。 三、HSCCC分離純化丹參醌類(lèi)成分的研究應(yīng)用HSCCC分離純化丹參中的醌類(lèi)化合物，所用溶劑體系為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-

7、水(6：4：6．5：3.5，v/v)。從200 mg丹參粗提物中分離純化得到14.21 mg二氫丹參酮Ⅰ，9.83mg 1，2，15，16-四氫丹參新醌，36.27 mg隱丹參酮，20.23 mg丹參酮Ⅰ，24.62 mg甘西鼠尾新酮，12.31 mg丹參新酮和38.78 mg丹參酮ⅡA。經(jīng)HPLC分析，純度分別為97.6％，95.2％，99.1％，99.1％，90.3％，99.4％和99.5％。由UV光譜和<'1>H-NMR數(shù)據(jù)來(lái)確定

8、了其化學(xué)結(jié)構(gòu)。 四、HSCCC分離純化魚(yú)腥草黃酮類(lèi)成分的研究建立了HSCCC分離純化魚(yú)腥草黃酮類(lèi)成分的新方法。溶劑體系為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3：7：1：9，v/v)。從200 mg魚(yú)腥草粗提物中一步分離純化得到5.5 mg未知物、16.6 mg槲皮苷和28.7 mg槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖苷，經(jīng)HPLC分析其純度分別為98.1％、99.5％和99.3％。由UV光譜、<'1>H-N