凝膠色譜分離純化大黃等中藥有效成分的研究.pdf

1、凝膠色譜技術是六十年代初發(fā)展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術,設備簡單、操作方便,不需要污染性有機溶劑,對高分子物質有很好的分離效果。目前已經廣泛應用于生物化學、分子生物學、生物工程學、分子免疫學以及醫(yī)學等有關領域,該技術不但應用于科學實驗研究,而且已經大規(guī)模地用于工業(yè)生產。瓊脂糖凝膠是由球狀瓊脂糖經兩次交聯(lián)而制得的凝膠,其高交聯(lián)結構顯著提高了顆粒剛性和物理化學穩(wěn)定性,粒度小而粒徑分布范圍窄,屬于高效凝膠,可在高流速下使用,并具有分

2、離范圍寬和分辨率高等特點。已用于天然中草藥中有效成分的分離,成功的分離了黃酮類和多酚類化合物,引起了國內外分離工作者的廣泛關注。
　　中藥有效成分的提取分離與純化技術研究是中藥現代化的核心,也是中藥企業(yè)發(fā)展的必經之路。開展中藥化學成分提取分離新技術的研究,對于提高企業(yè)的科技實力與競爭力,促進中藥現代化的發(fā)展具有重要意義。目前,應用瓊脂糖凝膠作為固定相在分離純化天然藥物中的蒽醌、黃酮和多酚等有效成分方面已獲得令人滿意結果。
　

3、　本文對瓊脂糖凝膠分離純化大黃、大豆、虎杖、知母、甘草和連翹葉中的有效成分進行了研究,建立了分離純化這幾種中草藥中有效成分的新方法,取得了相關核心技術,并利用紫外光譜(UV)、高效液相色譜(HPLC)、核磁共振波譜(NMR)等對目標產物的純度和化學結構進行了分析和鑒定,結合各組分的化學結構式及凝膠色譜保留時間,對瓊脂糖凝膠作為固定相分離純化蒽醌類化合物、黃酮類化合物、異黃酮類化合物和木脂素類化合物的機理進行了探討。
　　1.大黃中

4、有效成分的分離純化
　　以瓊脂糖凝膠為固定相,建立了分離純化大黃蒽醌類化合物和苯乙烯酸的新方法,以55％的甲醇(0.01%的HAC)水溶液作為流動相進行洗脫,可以得到苯乙烯酸、大黃酸、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、大黃素等六部分,分別收集,得到化合物的純度均在95%以上。經一步分離從大黃粗提物中分離得到苯乙烯酸、大黃酸、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚和大黃素六種高純度化合物。
　　根據大黃藥材粗提物中各組分的化學結構式以及

5、在瓊脂糖凝膠上的保留時間,對瓊脂糖凝膠(Superose12)色譜分離純化大黃有效成分的機理進行了探討。研究結果表明瓊脂糖凝膠分離純化中草藥中蒽醌類化合物的機理是目標化合物結構式中的羥基與Superose12合成殘留基團的氫鍵作用和疏水作用二者的協(xié)同作用,建立了分離純化中草藥中蒽醌類化合物的新方法。
　　2.大豆中異黃酮類化合物的分離純化
　　應用瓊脂糖凝膠作為固定相分離純化大豆中的異黃酮類化合物,以40%的甲醇和60%的甲

6、醇溶液作為流動相梯度洗脫,經一步分離從大豆提取物中得到大豆苷、染料木苷、黃豆黃苷、大豆苷元、染料木素和黃豆黃素六種高純度化合物,純度分別為99.0%,99.0%,90.5%,99.0%,94.5%和99.0%。
　　根據大豆粗提物中各組分的化學結構式以及在瓊脂糖凝膠上的保留時間,對瓊脂糖凝膠色譜分離純化異黃酮類化合物的機理進行了探討。研究結果表明瓊脂糖凝膠分離純化中草藥中異黃酮類成分的機理是目標化合物結構式中的羥基與Superos

7、e12合成殘留基團的氫鍵作用和疏水作用二者的協(xié)同作用,建立了分離純化中草藥中異黃酮類化合物的新方法。
　　3.虎杖中有效成分的分離純化
　　以瓊脂糖凝膠為填料,建立了分離純化虎杖中有效成分的新方法。以65%的甲醇溶液作為流動相,一步分離可以得到白藜蘆醇苷、大黃素-8-O-?-D-葡萄吡喃糖甙、白藜蘆醇和大黃素四種高純度化合物。
　　根據虎杖藥材粗提物中各組分的化學結構式以及在瓊脂糖凝膠上的保留時間,對瓊脂糖凝膠(Sup

8、erose12)色譜分離純化虎杖有效成分的機理進行了探討。研究結果表明瓊脂糖凝膠分離純化虎杖有效成分的機理是目標化合物結構式中的羥基與Superose12合成殘留基團的氫鍵作用和疏水作用二者的協(xié)同作用,建立了分離純化虎杖有效成分的新方法。
　　4.知母中有效成分的分離純化
　　建立了瓊脂糖凝膠作為固定相分離純化知母中有效成分的新方法,以60%的甲醇溶液作為洗脫流動相,從知母粗提物中一步分離得到單甲基-順-扁柏樹脂酚、順-扁柏

9、樹脂酚兩種高純度木脂素類化合物和新芒果苷、芒果苷兩種黃酮類化合物,純度分別為96.1%,98.0%,97.2%和98.1%。
　　根據中藥知母粗提物中各組分的化學結構式以及在瓊脂糖凝膠上的保留時間,對瓊脂糖凝膠色譜分離純化木脂素、黃酮類化合物的機理進行了研究。最終得出瓊脂糖凝膠分離純化知母中有效成分的機理是目標化合物結構式中的羥基與Superose12合成殘留基團間的氫鍵作用和疏水作用二者的協(xié)同作用,建立了分離純化知母中有效成分的

10、新方法。
　　5.甘草中有效成分的分離純化
　　以瓊脂糖凝膠作為固定相,建立了分離純化甘草中有效成分的新方法,即以60%的甲醇溶液作為流動相進行洗脫,經一步分離從甘草中分離得到異甘草素葡萄糖芹菜苷、甘草糖苷A、異甘草素和甘草香豆素四種高純度化合物,純度分別為91.3%,95.1%,91.8%和96.7%。
　　根據甘草粗提物中各組分的化學結構式以及在瓊脂糖凝膠上的保留時間,對瓊脂糖凝膠色譜分離純化甘草中有效成分的機理進

11、行了探討。研究結果表明瓊脂糖凝膠分離純化甘草中有效成分的機理是目標化合物結構式中的羥基與Superose12合成殘留基團的氫鍵作用和疏水作用二者的協(xié)同作用,開創(chuàng)了分離純化甘草中有效成分的新方法。
　　6.連翹葉中有效成分的分離純化
　　建立了瓊脂糖凝膠作為固定相分離純化連翹葉中有效成分的新方法,即以30%的甲醇溶液作為流動相進行洗脫,從連翹葉中一步分離得到連翹苷、連翹酯苷和蘆丁三種高純度化合物,純度分別為99.2%,96.3