中藥大黃抗內(nèi)毒素有效成分的分離與提取.pdf

1、細(xì)菌內(nèi)毒素(也稱內(nèi)毒素)是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)中的類脂多糖體(脂多糖，LPS)，此種脂多糖經(jīng)細(xì)菌胞壁合成后被轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞表面構(gòu)成胞壁外膜的組成成分，在細(xì)菌死亡溶解潰后從細(xì)胞結(jié)構(gòu)中釋放出來。內(nèi)毒素生物活性復(fù)雜，對人體作用廣泛，能使臟腑組織發(fā)生嚴(yán)重病變，可引起休克、彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)、多器官功能衰竭等。小劑量的LPS即可引起廣泛的生物學(xué)作用及病理學(xué)反應(yīng)，如內(nèi)毒素血癥、休克肺、心臟抑制及口腔疾患等，死亡率高達(dá)20％～60％。

2、 大黃為常用中藥，具有泄下、抗菌、抗腫瘤、抗高脂血癥，降低血壓、健胃、利膽保肝、強(qiáng)心、消炎、延緩衰老、調(diào)節(jié)免疫等作用。近代研究證明，大黃具有清除體內(nèi)氧自由基，調(diào)節(jié)免疫等重要藥理活性?，F(xiàn)已從大黃中分離到蒽醌、二蒽酮芪、苯丁酮、單寧、萘、色酮等不同種類的80種化合物，大體上分為蒽醌類、多糖類、鞣質(zhì)。 本實驗分別以水和乙醇為溶劑，對大黃進(jìn)行提取，通過正交實驗，比較了兩種溶劑對大黃的提取效果。實驗發(fā)現(xiàn)：以水為溶劑時，煎煮次數(shù)對大黃總蒽醌

3、提取物具顯著性影響(P＜0.05)，煎煮次數(shù)和浸泡時間對結(jié)合型蒽醌具有一定影響(0.05＜P＜0.1)，煎煮次數(shù)較多，3種物質(zhì)的提取率越高，這說明濃度差是大黃有效成分浸出的重要因素。對總蒽醌而言，浸泡比不浸泡提取率要-1-高。但浸泡0.5h與浸泡12h無顯著性差異，而結(jié)合型及還原型蒽醌則以不浸泡或浸泡0.5h為好，提示兩者在水中的不穩(wěn)定性。煎煮時間在60min之內(nèi)，對總蒽醌無顯著影響(P＞0.1)，而結(jié)合型蒽醌則以30min煎出量最高，

4、還原型蒽醌以10min最高。這亦說明，加熱時間長，對后兩種的穩(wěn)定性會產(chǎn)生一定的影響。以乙醇為溶劑的正交試驗結(jié)果可看出，乙醇濃度為80％，回流時間1小時，回流次數(shù)2次，溶劑量為10倍。對于總蒽醌含量而言，以乙醇為溶劑，回流次數(shù)仍是最重要的因素。乙醇濃度和回流時間對還原型蒽醌具顯著性影響(P＜0.05)，而加醇量則具一定影響(0.05＜P＜0.1)。從實驗結(jié)果可看出，水提組與醇提組比較，醇提組對3種大黃組分的提取效果明顯優(yōu)于水提組，醇提組中

5、，以80％乙醇為優(yōu)，且煎煮時間均不宜過長，控制在1左右為宜。 為進(jìn)一步將大黃中的有效成分分離，對大黃的乙醇初提物在不同的甲醇比例下進(jìn)行分離，實驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)氯仿：甲醇：水=4：3.8：2時的分離結(jié)果最好。使用前使兩相溶劑系統(tǒng)在分液漏斗中充分振蕩，讓其兩相間彼此盡量飽和，然后再靜置分層，取上相做固定相，下相做移動相。上機(jī)條件為流動相流速2.00mLmin，儀器轉(zhuǎn)速800r/min的分離條件。最后得到6種單一的蒽醌類物質(zhì)。 將大