瀉心湯抗內(nèi)毒素有效組分的藥理作用及機(jī)制研究.pdf

1、瀉心湯為醫(yī)圣張仲景名方，由大黃、黃連和黃芩三味藥組成，具有瀉火解毒、清熱燥濕的功效，研究表明瀉心湯治療急性感染性疾病與其抗內(nèi)毒素作用密切相關(guān)。因此，采用化學(xué)提取和藥理篩選相結(jié)合的方法對瀉心湯進(jìn)行抗內(nèi)毒素研究，對于深入探索其抗內(nèi)毒素的組方配伍規(guī)律、物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)理具有十分重要的意義。 本課題對瀉心湯全方及其拆方進(jìn)行飲片、不同極性部位和有效組分提取物三個(gè)水平上的化學(xué)提取，采用鱟試劑試管凝膠法、含藥血清動態(tài)比濁法和內(nèi)毒素大鼠發(fā)熱模型

2、對飲片和不同極性部位進(jìn)行抗內(nèi)毒素活性篩選；采用內(nèi)毒素誘導(dǎo)激活的大鼠腹腔巨噬細(xì)胞模型，以NO為指標(biāo)進(jìn)行抗內(nèi)毒素有效組分篩選，并對有效組分進(jìn)行配伍配比；采用RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)方法對有效組分進(jìn)行抗內(nèi)毒素機(jī)制研究。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明： 1.瀉心湯全方及其拆方飲片水煎液中大黃-黃芩配伍組的抗內(nèi)毒素活性最強(qiáng)；在不同極性部位中正丁醇部位活性最強(qiáng)，其中大黃-黃芩藥對的正丁醇部位在所有極性部位中活性最強(qiáng)，氯仿提取部位中凡含大黃的藥對其

3、氯仿部位活性均強(qiáng)于不含大黃的藥對，其中尤以大黃一黃芩藥對的氯仿部位活性較強(qiáng)；瀉心湯抗內(nèi)毒素有效組分為大黃的游離型及結(jié)合型葸醌類成分、黃芩的總黃酮類成分，它們均能明顯抑制內(nèi)毒素誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞NO分泌，結(jié)合型葸醌的抑制作用最強(qiáng)，結(jié)合蒽醌與總黃酮配伍后抑制NO分泌的作用略強(qiáng)于游離蒽醌與總黃酮的配伍。 2.瀉心湯有效組分能明顯抑制內(nèi)毒素誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥物質(zhì)IL-1β、TNF-α、iNOS mRNA的表達(dá)，同時(shí)也能明顯抑制內(nèi)毒素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

4、通路中NF-kB蛋白的表達(dá)，內(nèi)毒素受體CD14和TLR4 mRNA的表達(dá)則明顯不同，用藥組CD14 mRNA表達(dá)在2h時(shí)出現(xiàn)一過性減低，4h后用藥組與LPS組間表達(dá)無顯著性差異，而用藥組TLR4 mRNA的表達(dá)2h以后明顯降低，直至24h。結(jié)果表明瀉心湯有效組分抑制NF-kB和TNF-amRNA等的表達(dá)與TLR4密切相關(guān)，而與CD14的關(guān)系不大。 綜上，本課題針對瀉心湯清熱解毒的主要功效，以內(nèi)毒素炎癥模型篩選出其抗內(nèi)毒素有效組