連錢草抗泌尿系草酸鈣結石的藥理作用及其機制研究.pdf

1、目的：泌尿系統(tǒng)中結石的形成主要包括了結石結晶的成核、生長、聚集及滯留。其全球發(fā)病率為1％-20％，平均約為10％。伴隨微創(chuàng)外科新技術的不斷進步，結石患者絕大多數(shù)得到了滿意的療效，但結石的高復發(fā)率，抗結石藥物的不良反應，仍是一個困擾人類的大難題。雖然研究表明，噻嗪類利尿劑與檸檬酸鹽等能在一定程度上預防泌尿系統(tǒng)結石的形成與生長，但發(fā)現(xiàn)長期使用該類藥物會有較為明顯的副作用及不良反應。因此，人們目前試圖解決的一大難題便是重新開發(fā)研究一些較為安全

2、有效、價格低廉、能夠長期服用并且并發(fā)癥相對較少的抗結石藥物。近幾年，以銀杏葉、紫杉醇、青蒿素與喜樹堿等一批植物為研究基礎研發(fā)了一些新的藥物，其抗結石作用得到了肯定，更多植物制劑的研究為人們的研究提供了新的思路。祖國醫(yī)學中，連錢草常用來治療腎結石，但其作用并不肯定。我們擬將中藥多作用靶點的特點運用起來，通過蛋白組學的方法，探討其預防泌尿系結石的可能作用機制。
　　方法：細胞實驗中，通過草酸鈣結晶(67μg/cm2)持續(xù)24小時來刺激

3、人腎皮質近曲小管上皮細胞（HK-2）來建立草酸鈣結石的細胞模型。試驗時，細胞培養(yǎng)液中給予不同濃度的連錢草(0.5,1.0,2.0, or4.0mg/mL) or1.0mg/mL檸檬酸鉀，當CaOx結晶作用HK-2細胞1天后，收集細胞及培養(yǎng)液，并檢測氧化應激的指標：丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶（SOD）以及過氧化氫酶(CAT)。而后用免疫印跡（Western blotting）檢測泌尿結石相關蛋白骨橋蛋白（OPN）和腎損傷分子-1(K

4、IM-1)的表達情況。
　　動物實驗中，60只成年的雄性SD大鼠被隨機分入6組（分別為正常組、實驗組、陽性對照組、低中高濃度連錢草組）。當大鼠適應環(huán)境一周以后，予以實驗組大鼠1%的乙二醇飼料喂養(yǎng)4周，同時以不同濃度水平的連錢草灌胃。于第28天將其置入代謝籠中，留取24h尿液標本。10%的水合氯醛行腹腔注射麻醉大鼠后，采集血標本和腎標本。而后檢測尿液中的各項生化指標，在顯微鏡下觀察結晶的沉淀情況及病理變化情況，同時測定OPN以及KI