雌激素β受體在草酸鈣結(jié)石形成中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：
　　泌尿系結(jié)石為泌尿外科最常見的良性疾病之一。草酸鈣結(jié)石為最常見的腎結(jié)石類型，約占腎結(jié)石的80％。臨床上成年女性草酸鈣結(jié)石發(fā)病率遠(yuǎn)低于男性，此外女性結(jié)石患者其體內(nèi)雌激素水平遠(yuǎn)低于無(wú)結(jié)石的正常女性，提示雌激素/雌激素受體(Estrogen Receptor，ER)信號(hào)途徑可能具有抑制草酸鈣結(jié)石形成作用。然而，目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)雌激素對(duì)于腎結(jié)石形成的作用研究主要局限于激素本身，而對(duì)其受體在腎結(jié)石，尤其是草酸鈣結(jié)石形成過程中的作

2、用，及其相關(guān)分子信號(hào)通路機(jī)制上尚未闡明。
　　研究目標(biāo)：
　　本研究系統(tǒng)性的探討 ERβ介導(dǎo)的信號(hào)通路在草酸鈣結(jié)石形成過程中的作用及其具體的分子機(jī)制。探討草酸鈣結(jié)石性別差異性發(fā)病的原因，從而拓展泌尿系結(jié)石病因及預(yù)防的研究思路，為改進(jìn)泌尿系結(jié)石的治療方案提供理論依據(jù)及支持。
　　研究方法：
　　1）建立沉默ERβ人類肝細(xì)胞系（HepG2）,在體外培養(yǎng)觀察ERβ對(duì)肝臟細(xì)胞草酸合成的影響以及進(jìn)一步探尋 ERβ影響肝臟草

3、酸合成的具體分子生物學(xué)機(jī)制。
　　2）分別建立正常人類腎小管上皮細(xì)胞、沉默 ERα腎小管上皮細(xì)胞、沉默ERβ腎小管上皮細(xì)胞系，在體外草酸的環(huán)境培養(yǎng)以探尋ER對(duì)于草酸引起的腎小管上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷方面的影響。
　　3）建立全身性ERβ敲除雌性小鼠草酸鈣結(jié)石模型，通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ERβ信號(hào)通路在草酸鈣結(jié)石形成過程中的具體作用及機(jī)制。
　　研究結(jié)果：
　　1）通過shRNA使HepG2細(xì)胞沉默ERβ后，細(xì)胞合成草酸能

4、力增加，提示 ERβ可減少肝細(xì)胞草酸合成，機(jī)制研究表明 ERβ可直接結(jié)合于丙氨酸乙醛酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine-glyoxylate aminotransferase, AGT1）基因的啟動(dòng)子區(qū)域，增強(qiáng)AGT1的表達(dá)，從而減少肝細(xì)胞草酸的合成。
　　2）在草酸培養(yǎng)環(huán)境下，腎小管上皮細(xì)胞沉默 ERβ后，細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激水平及細(xì)胞損傷程度將急劇增加，提示ERβ可以減少草酸引起的腎小管上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷，從而減少晶體的粘附。機(jī)制研究

5、結(jié)果進(jìn)一步表明ERβ可直接抑制NADPH氧化酶2（NADPH Oxidase2, NOX2）的表達(dá)從而減少細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平及細(xì)胞損傷程度。
　　3）經(jīng)過7天腹腔注射乙醛酸誘導(dǎo)小鼠腎臟草酸鈣結(jié)石形成，ERβ敲除雌性小鼠相比野生型雌性小鼠，腎臟草酸鈣晶體數(shù)目明顯增加，24小時(shí)尿液排泄草酸明顯增加，同時(shí)肝臟AGT1表達(dá)減少，腎臟NOX2表達(dá)增加以及腎臟氧化應(yīng)激水平急劇增高。利用NOX2特異性抑制劑apocynin可以部分逆轉(zhuǎn)ERβ敲除