Regucalcin在大鼠腎草酸鈣結(jié)石形成過程中的表達(dá)研究.pdf

1、研究背景：泌尿系結(jié)石是一種全球性的疾病，也是我國最常見的泌尿外科疾病之一，其發(fā)病率目前還在日益增高，已嚴(yán)重影響人們的身體健康和生活質(zhì)量。由于80％以上的結(jié)石類型為草酸鈣結(jié)石,因此，明確草酸鈣結(jié)石的發(fā)病機(jī)制，進(jìn)一步研究行之有效的防治方案，具有極為重要的臨床意義。目前研究顯示認(rèn)為細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)的破壞導(dǎo)致的細(xì)胞損傷進(jìn)而促進(jìn)晶體粘附是草酸鈣結(jié)石形成的最主要原因之一，然而具體機(jī)制仍不明確。Regucalcin（RGN）作為一種新型的鈣結(jié)合蛋白，對維

2、持細(xì)胞內(nèi)Ca2+穩(wěn)態(tài)和抑制細(xì)胞損傷具有十分重要的作用。當(dāng)RGN在細(xì)胞中表達(dá)的減少時，往往會因鈣穩(wěn)態(tài)破壞而伴隨某些疾病發(fā)生。而過表達(dá)的 RGN可以抑制多種因素誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷和凋亡。由此我們推測 RGN表達(dá)會影響腎小管上皮細(xì)胞的損傷，促進(jìn)草酸鈣晶體的粘附和聚集，進(jìn)而形成結(jié)石。本項目擬研究 RGN在腎草酸鈣結(jié)石形成過程中的表達(dá)及作用，探討RGN在草酸鈣結(jié)石形成過程中的作用及機(jī)制，從而進(jìn)一步完善腎草酸鈣結(jié)石的病因?qū)W研究。
　　研究目的：本

3、項目擬通過在草酸鈣結(jié)石大鼠模型中檢測RGN的表達(dá)，并進(jìn)一步在大鼠腎小管上皮細(xì)胞中檢測一水草酸鈣晶體（COM）對RGN表達(dá)的影響，探討RGN在草酸鈣結(jié)石形成過程中的作用及機(jī)制，為草酸鈣結(jié)石的治療和預(yù)防提供新的干預(yù)靶點及新的思路。
　　研究內(nèi)容與方法：
　　1.使用1%乙二醇+1%氯化銨自由飲水構(gòu)造大鼠腎草酸鈣結(jié)石模型，通過大鼠血、尿生化及腎組織切片觀察模型成功率，并使用WB、PCR、IHC的方法檢測RGN在草酸鈣結(jié)石模型大鼠中

4、的表達(dá)變化。
　　2.使用不同濃度的一水草酸鈣晶體在不同條件下刺激大鼠腎小管上皮細(xì)胞NRK-52E，通過WB和PCR方法檢測RGN的表達(dá)。
　　研究結(jié)果：
　　1.使用1%乙二醇+1%氯化銨自由飲水一個月喂養(yǎng)Wistar大鼠后，無大鼠死亡。檢測大鼠各項指標(biāo)發(fā)現(xiàn)：造模組的大鼠的體重明顯減輕，差異有顯著性(271.7±31.5比327.0±25.9g，P<0.05)；在大鼠24小時尿液指標(biāo)的結(jié)果中可以發(fā)現(xiàn)：造模組大鼠的24

5、小時尿草酸（3.10±1.95比1.97±1.13 mmol/24h）和鎂（6.82±0.69比2.81±1.06 mmol/24h）都要明顯高于正常組，而尿鈣（1.68±0.41比2.64±1.12 mmol/24h）要明顯低于正常組，其差異都具有統(tǒng)計學(xué)意義。血生化結(jié)果顯示，造模組血肌酐（38.60±10.16比10.02±3.26 mmol）和尿素氮（25.80±3.19比6.33±0.69 mmol）明顯高于對照組，其差異都具有統(tǒng)

6、計學(xué)意義。在偏光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)：造模組全部大鼠腎組織切片腎小管內(nèi)均含有晶體，而對照組未發(fā)現(xiàn)晶體。
　　2.處死大鼠后，檢測大鼠腎皮質(zhì)RGN的表達(dá)發(fā)現(xiàn)：WB和RT-PCR法檢測出造模組大鼠腎組織RGN明顯低于正常對照組；IHC法檢測造模組大鼠腎皮質(zhì)RGN的表達(dá)也同樣降低，而且以晶體粘附處降低尤為明顯。
　　3.使用COM處理大鼠腎小管上皮細(xì)胞NRK-52E后，檢測RGN的表達(dá)發(fā)現(xiàn)：在不同濃度（0、25、50、100ug/cm