山楂葉有效成分提取分離及利用研究.pdf

1、山楂葉是山楂屬植物（CrataegusL.）的干燥葉，作為傳統(tǒng)中藥材在我國已有近千年的藥用歷史，具有預(yù)防心血管疾病、降糖降脂、延緩衰老、抑菌等功效。山楂葉中含有豐富的黃酮及三萜類化合物，這兩類化合物均是山楂葉主要的藥理活性成分。提取分離山楂葉有效成分并研究其主要活性，開發(fā)具有保健功能的山楂葉產(chǎn)品，能夠延長山楂葉加工產(chǎn)業(yè)鏈，充分提高山楂葉的利用價值，實現(xiàn)山楂葉功能成分的梯次利用。因此，開展山楂葉活性成分提取分離研究，開發(fā)新型保健產(chǎn)品具有重

2、要的經(jīng)濟價值和社會意義。本文主要研究內(nèi)容如下:
　　1、采用超聲波輔助乙醇提取山楂葉總黃酮，在單因素試驗基礎(chǔ)上，選取對總黃酮得率影響顯著的乙醇體積分數(shù)、提取溫度、料液比及超聲時間為自變量，總黃酮得率為響應(yīng)值，根據(jù)Box-Benhnken試驗設(shè)計原理優(yōu)化出山楂葉總黃酮超聲提取最佳工藝參數(shù):乙醇體積分數(shù)70％、料液比1∶35、提取時間39min、提取溫度72℃，在此條件下實際測定的總黃酮得率可達28.991mg/g，比普通浸提法提高9

3、1.9％，比乙醇回流法提高39％。
　　2、山楂葉總黃酮體外活性研究表明:山楂葉總黃酮對α-葡萄糖苷酶表現(xiàn)出較強的抑制作用，IC50值為1.36mg/mL，抑制能力相當于阿卡波糖(2.75mg/mL)的2倍;對α-淀粉酶抑制作用的IC50值為1.34mg/mL，雖然抑制效果弱于阿卡波糖，但與植物來源的具有α-淀粉酶抑制作用的黃酮類物質(zhì)相比，山楂葉總黃酮表現(xiàn)出較好的抑制效果。山楂葉總黃酮對DPPH、ABTS自由基具有較好的清除能力，

4、IC50值分別為754.66μg/mL、113.47μg/mL，并且對Fe3+具有一定的還原力，但其抗氧化能力均明顯弱于陽性對照抗壞血酸。
　　3、運用各種分離技術(shù)，采用活性追蹤方式對山楂葉水不溶部位、乙酸乙酯部位進行分離，從水不溶部位和乙酸乙酯部位分離得到具有較強α-葡萄糖苷酶抑制活性的單體化合物1、單體化合物2，從乙酸乙酯部位分離得到具有較好α-淀粉酶抑制活性的化合物3，經(jīng)NMR、IR等波譜分析技術(shù)鑒定，確定分別為槲皮素(1)

5、、熊果酸(2)和槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷(3)。槲皮素、熊果酸IC50值分別為0.113mg/mL、0.014mg/mL，遠低于陽性對照阿卡波糖(2.75mg/mL)，表明它們的α-葡萄糖苷酶抑制劑活性遠高于阿卡波糖，抑制動力學(xué)研究結(jié)果顯示，槲皮素、熊果酸對α-葡萄糖苷酶的抑制類型均為非競爭性抑制;槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷IC50值為0.851mg/mL，高于阿卡波糖IC50值，但仍表現(xiàn)出較好的抑制效果，對α-淀粉酶的抑制類

6、型為競爭性抑制類型。
　　4、按照一定的加工工藝制作山楂葉綠茶、山楂葉黑茶，通過特征成分測定發(fā)現(xiàn)，山楂綠茶保持較高黃酮含量(24.3mg/g)及多酚含量(15.4mg/g)，與山楂鮮葉相比下降不明顯，而山楂黑茶黃酮及多酚含量大幅度降低;氨基酸測定表明，山楂綠茶氨基酸總量比原葉提高33.08％，而山楂黑茶各種氨基酸含量明顯下降，比原葉降低25.86％。香氣成分分析發(fā)現(xiàn)，山楂綠茶共有43種揮發(fā)性成分，香氣成分醇醛酮含量均有所提高，其中