桃葉有效成分提取研究.pdf

1、我國(guó)地大物博，各種資源極其豐富，植物類資源就是其中的一種。桃樹(shù)屬于植物類資源，在我國(guó)被廣泛種植。桃葉，作為這種植物資源中數(shù)量較大的一部分，卻沒(méi)有得到很好的開(kāi)發(fā)和利用。桃葉具有很多的藥效作用，例如它具有抗過(guò)敏、抗菌、消炎、止痛、通便的作用，另外，它還有殺蟲(chóng)的功效。但是，目前對(duì)桃葉的綜合開(kāi)發(fā)利用研究還很少。桃葉的藥用價(jià)值與桃葉中含有的有效成分是密不可分的。所以，本文以得到品質(zhì)優(yōu)良的有效成分產(chǎn)品為主要目標(biāo)，針對(duì)其提取、純化及檢測(cè)方法進(jìn)行了深入

2、的研究和探索，以便得到提取純化這些有效成分的最先進(jìn)、最經(jīng)濟(jì)實(shí)用的工藝。本研究得出的結(jié)論為桃葉合理有效的利用提供了參考依據(jù)，具有一定的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。 本文以桃葉為原料，用超臨界CO2萃取法提取桃葉中的柚皮素和葉綠素，研究萃取溫度、萃取壓力、萃取時(shí)間和夾帶劑添加量對(duì)產(chǎn)品得率的影響。通過(guò)試驗(yàn)，確定最佳工藝為：萃取溫度60℃，萃取壓力30MPa，萃取時(shí)間6h，料液比1∶2.0(桃葉與95％乙醇的質(zhì)量比)。檢測(cè)結(jié)果顯示，超臨界CO2

3、萃取法是提取桃葉中柚皮素和葉綠素最有效的方法。將粗提物用高速逆流色譜技術(shù)進(jìn)行純化，得出最佳的純化條件為：選用氯仿∶甲醇∶水(4∶3∶2)這個(gè)容劑體系進(jìn)行分離，上相為固定相(水相)，下相為流動(dòng)相(氯仿相)，轉(zhuǎn)速為800r/min，流速為1.5mL/min。最后，經(jīng)計(jì)算，從100g原料可以得到6.25g粗提物浸膏，經(jīng)過(guò)HSCCC純化后可以得到0.38g葉綠素和2.00g柚皮素產(chǎn)品，二者純度分別為90％和95％以上。 本文采用有機(jī)溶劑

4、法和超聲波輔助萃取法對(duì)桃葉中的總黃酮進(jìn)行了提取。通過(guò)試驗(yàn)，確定有機(jī)溶劑提取法(乙醇)的最佳工藝為：乙醇濃度70％、時(shí)間4h、溫度60℃、料液比1∶25(g∶mL)；采用超聲波輔助萃取法的最佳工藝為：溶劑為70％乙醇、萃取溫度60℃、料液比1∶20(g∶mL)、超聲波功率225w、萃取時(shí)間40min。有機(jī)溶劑法可以使總黃酮得率達(dá)到7.48％；超聲波輔助萃取法可以達(dá)到7.51％。二者提取結(jié)果雖然相近，但是后者所用時(shí)間明顯短于前者，溶劑用量也

5、小于前者。所以，采用超聲波輔助萃取法提取桃葉中的總黃酮不僅可以大大縮短生產(chǎn)周期，還可以減少溶劑用量降低成本。將總黃酮粗提物用大孔吸附樹(shù)脂法進(jìn)行純化，其最佳純化工藝為：將超聲波輔助萃取法得到的粗提液用石油醚法除去葉綠素后，采用AB-8大孔吸附樹(shù)脂，將濃度為0.112mg/mL的上柱液上柱4BV，以1.0mL/min吸附流速進(jìn)行吸附，吸附完畢后，用濃度為80％的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫流速為0.6mL/min，收集洗脫液即得到總黃酮純化液。經(jīng)

6、測(cè)定，收集液干燥后得到的純化物中，總黃酮的含量為46.1％。 本文確立了薄層層析法定性分析桃葉中柚皮素的方法，分析條件為：吸附劑，薄層層析硅膠；展開(kāi)劑，氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(15∶40∶22∶10)，10℃以分層的下層溶液為展開(kāi)劑；檢出，2％的三氯化鋁乙醇試液，置紫外燈(365nm)下觀察。柚皮素經(jīng)絡(luò)合后在紫外燈的照射下顯黃綠色熒光。 本文確立了紫外分光光度法分析桃葉中柚皮素的方法。對(duì)柚皮素標(biāo)準(zhǔn)品和超臨界提取物進(jìn)行光

7、譜掃描，結(jié)果顯示二者在325nm處有吸收峰，因此確定325nm為紫外分光光度法分析柚皮素的檢測(cè)波長(zhǎng)。紫外分光光度法簡(jiǎn)便，對(duì)樣品處理要求不高，可以作為常規(guī)的分析方法。 本文確立了高效液相色譜法(HPLC)分析桃葉中的柚皮素和奎寧酸的方法。分析桃葉中柚皮素的HPLC條件為：流動(dòng)相，甲醇-水-乙酸(46∶53∶1)；柱溫，40℃；色譜柱，ODS反相柱，250×4.6mm，孔徑5μm；流速，1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)，290nm。分析桃葉

8、中奎寧酸的HPLC條件為：流動(dòng)相，3％甲醇-0.01mol/L磷酸氫二鈉(pH2.53，用濃度≥85.0％的磷酸調(diào)節(jié)，酸堿滴定儀調(diào)節(jié)控制)；柱溫，30℃；色譜柱，ODS反相柱，250×4.6mm，孔徑5μm；流速，0.7mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)，210nm。HPLC法具有靈敏、準(zhǔn)確等特點(diǎn)。本文所確定的HPLC方法可以為生產(chǎn)過(guò)程中更為準(zhǔn)確地進(jìn)行柚皮素和奎寧酸的檢測(cè)提供依據(jù)。 另外，本文還初步研究了柚皮素純化物的抑菌活性。試驗(yàn)結(jié)果表明