場效應(yīng)輔助提取-高速逆流色譜聯(lián)用在中草藥有效成分分離純化中的應(yīng)用.pdf

1、中草藥有效成分快速高效分離和純化制備是生產(chǎn)制備中藥標(biāo)準(zhǔn)品、對照品生產(chǎn)的核心，也是中藥質(zhì)量控制和中藥現(xiàn)代化的重要組成部分。傳統(tǒng)的以溶劑提取結(jié)合柱色譜提取純化制備中草藥有效成分標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌返姆椒ㄒ虿襟E繁瑣、周期長、效率較低而無法滿足中藥現(xiàn)代化生產(chǎn)和質(zhì)量控制的需要。本論文結(jié)合微波輔助提取(MAE)和加速溶劑提取(ASE)方法具有快速高效的特點，以及高速逆流色譜(HSCCC)具有制備量大、回收率高的優(yōu)勢，研究了MAE/HSCCC和ASE/HS

2、CCC方法，直接從巖黃連、朱砂根、腫節(jié)風(fēng)和石吊蘭等中草藥中分離純化得到了高純度的有效成分對照品，并采用HPLC、MS和1H NMR等技術(shù)表征了有效成分對照品的純度和結(jié)構(gòu)。主要研究內(nèi)容如下：
　　 1.綜述了中草藥有效成分提取和分離技術(shù)的研究進(jìn)展，重點介紹了微波輔助提取技術(shù)、加速溶劑提取技術(shù)和高速逆流色譜技術(shù)在中草藥有效成分提取分離純化中的應(yīng)用進(jìn)展。
　　 2.開展了MAE/HSCCC聯(lián)用分離制備中草藥有效成分的研究。采用

3、MAE提取、粗提液濃縮后直接進(jìn)入HSCCC分離純化，建立了分別從巖黃連和朱砂根中直接分離純化脫氫卡維丁和巖白菜素對照品的MAE/HSCCC聯(lián)用方法。
　　 (1)建立了直接從巖黃連藥材中分離純化脫氫卡維丁的MAE/HSCCC聯(lián)用方法，并采用HPLC、MS和1H NMR分析表征了純化得到的脫氫卡維丁對照品。通過正交試驗優(yōu)化了MAE提取條件，得到MAE最優(yōu)條件為：提取溫度60℃、液固比20 mL/g、提取時間15 min和微波功率7

4、00 W。優(yōu)化得到脫氫卡維丁的HSCCC分離條件為：以氯仿-甲醇-0.5 mol/LHC1(4∶0.5∶2，v/v/v)為兩相溶劑體系，上相為固定相，下相為流動相，轉(zhuǎn)速為800 rpm，流速為2 mL/min，最大進(jìn)樣量900 mg粗提物。采用該MAE/HSCCC聯(lián)用方法可一次直接從6 g巖黃連藥材中分離純化得到純度為98.9％的脫氫卡維丁42 mg，總耗時4 h。實現(xiàn)3次連續(xù)進(jìn)樣過程，從2700 mg粗提物中共制備純度超過98％的脫氫

5、卡維丁122.1 mg，總耗時約12 h。
　　 (2)建立了直接從朱砂根、巖陀和落新婦中分離純化巖白菜素的MAE/HSCCC聯(lián)用方法，并采用HPLC、MS和1H NMR分析表征了其純度和結(jié)構(gòu)。通過正交試驗優(yōu)化了MAE提取條件，得到朱砂根的最優(yōu)條件為：提取溫度60℃，液固比10 mL/g，提取時間15 min和甲醇濃度60％(v/v)；巖陀的最佳條件為：提取溫度50℃、液固比15 mL/g、提取時間5 min和甲醇濃度60％(v

6、/v)；落新婦的最優(yōu)條件為：提取溫度50℃、液固比10 mL/g、提取時間5 min和甲醇濃度60％(v/v)。比較研究了MAE和索氏提取法(SE)提取巖白菜素的提取率，MAE使用提取溶劑量少且對中草藥有效成分提取效率較高。優(yōu)化的巖白菜素的HSCCC分離條件為：以乙酸乙酯-正丁醇-水(3∶2∶5，v/v/v)為溶劑體系，上相為固定相，下相為流動相，轉(zhuǎn)速900rpm，流速2 mL/min，一次最大進(jìn)樣量進(jìn)樣160 mg粗提物。采用該MAE

7、/HSCCC聯(lián)用方法可一次直接從160 mg朱砂根、160 mg巖陀和160 mg落新婦分別分離純化得到純度為99％的巖白菜素18.6，25.0和8.4 mg，總耗時3 h。
　　 3.開展了ASE/HSCCC聯(lián)用方法分離制備中草藥有效成分的研究。以腫節(jié)風(fēng)中異秦皮啶和石吊蘭中石吊蘭素為對象評價了MAE/HSCCC聯(lián)用方法的可行性。
　　 (1)建立了ASE/HSCCC聯(lián)用直接分離純化腫節(jié)風(fēng)中異秦皮啶的方法，采用HPLC、

8、MS和1H NMR分析表征了異秦皮啶的純度和結(jié)構(gòu)。以HSCCC溶劑體系下相為提取溶劑，通過正交試驗優(yōu)化的ASE的提取條件為：提取80℃、提取時間15 min、壓力為10 MPa和靜態(tài)循環(huán)1次。將腫節(jié)風(fēng)的ASE粗提液以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶2∶1∶2，v/v/v/v)為溶劑體系，上相為固定相，下相為流動相，在轉(zhuǎn)速800 rpm，流速2 mL/min條件下采用HSCCC分離純化，可直接從1.0 g原樣中一次分離得到純度大于99％異

9、秦皮啶0.48 mg，總耗時2.5 h。實現(xiàn)4次連續(xù)進(jìn)樣過程，從4.0 g原樣中共制備1.94 mg異秦皮啶，總耗時約在9 h。
　　 (2)建立了ASE/HSCCC聯(lián)用直接分離純化石吊蘭中石吊蘭素的方法。通過正交試驗優(yōu)化的最優(yōu)ASE條件為：提取溫度120℃，壓力6 MPa，提取時間10 min。將腫節(jié)風(fēng)的ASE粗提液以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(7∶3∶5∶5，v/v/v/v)為溶劑體系，上相為固定相，下相為流動相，轉(zhuǎn)速800