缺糖氧再灌注后神經(jīng)元氧化及抗氧化分子的變化及胞二磷膽堿的保護作用.pdf

1、第一部分海馬及皮層神經(jīng)元體外原代培養(yǎng)及缺糖氧再灌注損傷易感性的比較目的：建立海馬及皮層神經(jīng)元原代培養(yǎng)、缺糖氧再灌注損傷模型，在此基礎(chǔ)上分析海馬、皮層神經(jīng)元對缺糖氧再灌注損傷的易感性。方法：采用體外無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)海馬、皮層神經(jīng)元，取8-10d的海馬、皮層神經(jīng)元，采用剝奪培養(yǎng)液氧糖法建立體外缺糖氧再灌注損傷模型，于缺糖氧再灌注3h、6h及24h時，比較觀察兩種神經(jīng)元一氧化氮(NO)的釋放量、谷胱甘肽(GSH)的含量及一氧化氮合酶(NOS)

2、、谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)的活性變化；于缺糖氧再灌注24h時，檢測兩種神經(jīng)元乳酸脫氫酶(LDH)的釋放量，并采用臺盼藍染色、HocheSt33258神經(jīng)元核染色觀察兩種神經(jīng)元死亡、凋亡的改變。結(jié)果：缺糖氧再灌注后，海馬神經(jīng)元NOS的活性、NO的含量明顯高于皮層神經(jīng)元，而GPx的活性、GSH的含量低于皮層神經(jīng)元(P<0.05)：缺糖氧再灌注后，海馬神經(jīng)元的死亡、凋亡率亦明顯高于皮層神經(jīng)元(P<0.05)。結(jié)論：海馬神經(jīng)元相較于皮層神經(jīng)

3、元更易受缺糖氧再灌注的損傷，其可能與缺糖氧再灌注后海馬神經(jīng)元氧應激產(chǎn)物過多如NOS活性及N0釋放量等的增高、抗氧化系統(tǒng)防御下降如GPx活性、GSH含量的下降有關(guān)。 第二部分胞二磷膽堿對大鼠海馬神經(jīng)元缺糖氧再灌注損傷的保護作用目的觀察胞二磷膽堿對大鼠海馬神經(jīng)元缺糖氧再灌注損傷的保護作用。方法建立海馬神經(jīng)元缺糖氧再灌注損傷模型，隨機分組為正常對照組、缺糖氧再灌注組、胞二磷膽堿干預組(1、10、100umol/L)，觀察再灌注6、24

4、h還原型谷胱甘肽含量以及谷胱甘肽過氧化物酶活性的改變；于再灌注24h檢測海馬神經(jīng)元四甲基偶氮唑鹽(MTT)代謝率，以及流式細胞術(shù)檢測凋亡。結(jié)果與缺糖氧再灌注組相比，胞二磷膽堿于再灌注6h可明顯提高GSH的含量及GPx的活性(P<0.05)；于再灌注24h可增高MTT代謝率，提高GPx的活性及減少海馬神經(jīng)元凋亡(P<0.05).結(jié)論胞二磷膽堿對海馬神經(jīng)元缺糖氧再灌損傷有明顯的保護作用，其機制可能與改善神經(jīng)元GSH舍量、GPX活性及減少凋亡